La formulación de ingredientes básicos, como peptonas, extractos de levadura, agar, sustancias amortiguadores y antibióticos, se modifica hasta alcanzar la consistencia del medio. Se disuelve en agua destilada la cantidad requerida de medio deshidratado o de cada uno de los ingredientes mediante agitación continua seguida de calentamiento, si es preciso. Los medios que contienen agar deben empaparse adecuadamente con la agitación apropiada antes de calentar. El pH debe ajustarse, y el medio dispensarse en los recipientes apropiados para esterilización con calor húmedo en un autoclave. Las sustancias termosensibles (proteínas, enzimas) se esterilizan utilizando membranas de filtración.
Los medios de cultivo deben almacenarse a las temperaturas especificadas para evitar que se modifique su composición, y no más allá del periodo de validez del producto. La preparación y la conservación asépticas son esenciales para proteger los medios de cultivo de la contaminación microbiana. La pérdida de agua durante el almacenamiento puede reducirse al mínimo utilizando un envoltorio impermeable o almacenando a 5 °C ± 3 °C. La degradación química, por ejemplo la oxidación o la pérdida antimicrobiana, puede retrasarse mediante protección contra la luz, el calor y la deshidratación. :pencil2: