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bio moléculaire : maintien et express° info gén - Coggle Diagram
bio moléculaire : maintien et express° info gén
bio de l'ADN
quest° fondamentales
résolut° de la struct de l'ADN
dlbe hélice régulière droite
brins complémentaires
brins anti//
commt cette info est-elle
répliquée
transmise
utilisée ou exprimée
déf
science consacrée à étude mol supportant message héréditaire (acides nucléiques ADN et ARN)
analyse ds mol, struct génome et altérat° (mutat°) ainsi que mécanismes express° normale et pathologique des gènes
étude au niveau moléculaire des mécanismes qui sous-tendent les syst vivants et impliquant ds acides nucléiques et/ou prot
discipline issue gén et biochimie
gène : unité fonctionnelle de l'hérédité, séq ADN contenant info et élémts nécessaires à son express°
dogme central
réplicat° et maintien info gén
approche expérimentale
marquage différentiel ADN parental et néo-synthétisé
1.croissance de bact en présence de sources d'azote léger ou lourd
2.extract° ADN
séparat° et analyse ADN
séparat° et analyses ADN marqués
ultracentrifiugat° (gradient de densité)
stratégie et résultats théoriques
choix modèle réplicat°
réplicat° semi-conservative
visualisat° ADN bactérien
croissance bact en présence thymidine H3
extract° ADN
autoradiographie
ADN bactérien circulaire
format° d'1 struct en thêta suggérant une bulle de réplicat°
esb ADN bactérien se compose d'1 réplicon unique
cycle de réplicat°
pt unique d'initiat°
réplicat° génomes eucaryotes et procaryotes bidirectionnelle
activité réplicative
(dNMP)n +dNTP -> (dNMP)n+1 + PPi
ADN -> ADN allongé
ADN poly (ADN poly I) E. coli identifiée en 1958
nécessite amorce pr démarrage
synth 5' vers 3' par lecture d'1 matrice ADN
ADN pol I pas enz réplicative ms soulève un dilemme
réplicat° semi-conservative
1; incubat° courte de bact en présence de thymidine H3
arrêt synth et extract° ADN
analyse par ultracentrifugat°
accumulat° fragmts ADN de 1-2 kb
présence de courts fragmts ARN (10-12 bases)
initiation de la répliat° bactérienne
DnA : initiateur de réplicat°
DNaB : hélicase réplicative
DnaG : primase (ARN pol ADN dép)
chq primosome synthétise amorce ARN utilisée par autre réplisome
amorce ARN = relique du monde ARN ?
assemblage réplisome
hélicase (DnaB) + chargeur de pinces bêta + pinces bêta² + ADN polymérase coeur
composit° moléculaire de la fourche
primosome + holoenz + SSB (single strand binding prot) = réplisome
ADN poly III core enz
sous unité alpha : ADN poly
sous-unité epsilon : correct° erreur
sous unit thêta : stimule sous unité épsiole
1 mutat° ttes les 10^3 réplicat° d'un génome de 10^6 pb
ADN poly III holoenz
3 cores enz + 3 pinces bêta² + 1 chargeur de pinces = ADN pol III holoenz
processivité holoenz
pince bêta (anneau de processivité) augmente considérablemt processivité enz en la maintenant associé à ADN
rôles du chargeur de pinces bêta
sous unité r
plateforme assemblage
trimérise core en enz
sous unité delta : ouverture anneaux bêta
sous unité delta' : rôle structural
réplisome en act°
synth continue du brin précoce
synth du brin tardif
amorce ARN de 10 à 12 nucléotides synthétisées par primase DnaG
hte concentrat° locale en ADN pol III
modèle de trombone : format° d'1 couple SB stabilisée par les SSB
env 1-2 sec de synth par fragmt Okazaki
contraintes topologiques
déplacemt fourche de réplicat° induit des contraintes topologique pouvant ê supprimés par intro de super-tours négatifs
mode act° gyrase bactérienne
the multisubunit enz binds a segmt of a DNA mol
a 2nd segmt of the same DNA mol is bound at the N gate
2nd segmt of DNA is trapped. The light blue segmt is cleaved on both strands to form two 5'-phosphotyrosil linkages to the enz
2nd DNA segmt is passed througt the break
the broken DNA is religated and the 2nd DNA is released through the C. gate
introduit super-tours négatifs ds ADN
ciblée par antibio
gyrase fait partie réplisome
ADN poly I
fragmt klenow : ADN poly, 3'-5' exonucléase
5'-3' exo
activité 5'-3' exonucléase de l'ADN pol I
possède 3 activités
poly
3'-5' exo
5'-3' exo
capable de réaliser une "nick translat°"
impliquée ds éliminat° des amorces ARN des fragmts Okazaki
finalisat° brin tardif
nick translat°
ligat°
enz = ADN ligase
terminaison réplicat°
Tus (ter utilizat° sub) = contre-hélicase recrutée sur Ter
Tus-Ter = pièce à réplisome
mécanisme moléculaire mal compris
situat° chez eucaryote
réplicat° égalemt bidirectionnelle et semi-discontinue
uniquemt durant phase S
initiat° à pls pts
génomes eucaryotes composés de pls centaines de réplicons en gal asynchrones
machinerie + lente
réplisome eucaryote
mécanisme gal commun aux batéries
pol alpha-primase synthétise et étends amorce ARN
PCNA = anneau formé d'un trimère
implicat° ADN pol spécialisées des brins précoce (epsilon) et tardif (delta)
état de méthylat° ADN
ADN bactérien méthylé ds la C
méthylat° post-réplicat° catalysées par méthylases DAM et DCM
ADN bact méthylé ap synth
modif introduite chez E. coli
post réplicat°
par méthylase Dam sur GATC
rôle hémiméthylat° temporaire
marque différenciant temporairemt ADN parental ADN néosynthétisé
en cas erreur non corrigée, machinerie dédiée peu discriminer original erreur
exemple réparat° ADN
cas machinerie réparat° Mischmatchs
différencie ADN parental de l'ADN néosynthétisé par son état de méthylat°
correct° erreurs incorporat° résiduelles
MutL-MutS identifie mismatch
endonucléases MutH se lie entre GATC et MutSL
MutH marque brin à réparer
existe de nbrx autres machineries de contrôle et maintien intégrité du génome
express° des gènes chez les procaryotes
transcript° procaryote