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TECNOLOGIA RICOMBINANTE - Coggle Diagram

- - - - attivazione enzimi di restrizione --> distruzione del genoma fagico
        
        NO REPLICAZIONE VIRALE
      - replicazione del fago, si incapsula e LISI BATTERICA
        
        REPLICAZIONE VIRALE
        
        in questo caso METILAZIONE in adenilato (7-metil adenina)
  - - - 2- i frammenti sono ligati al DNA dei vettori
        
        3-TRASFERIMENTO della molecola di DNA ricombinante all'interno della cellula ospite
        
        4- Replicazione delle cellule batteriche in una piastra
        
        SELEZIONARE colonia batterica pura
        
        Blue- white screening
        
        Blu--> vettore
        
        Bianco--> vettore ricombinante
        
        tagliare i batteri non selezionati con antibiotici
        
        purificare il plasmide con DNA ricombinante
        
        5- Il vettore ricombinante viene estratto dal batterio per essere analizzato)
        
        vettori
        
        si replicano indipendentemente
        
        MCS
        
        marker
        
        si può isolare dalla cellula ospite
        
        1 more item...
        
        tipi
      - 3 classi di enzimi di restrizione
        
        riconoscimento non specifico
        
        sliding/ hopping/ jumping
        
        riconoscimento specifico
    - - Fagi lambda come vettori
      - BAC
      - YEAST
  - - - 1- isolare una proteina
        
        cromatografia per affinità
      - 1- isolare mRNA
        
        cromatografia per affinità --> sfrutta coda di poly-A
        
        2- retrotrascrizione--> si genera cDNA
        
        3- eluizione
        
        4- sintesi del filamento complementare--> double stranded cDNA
        
        CONCETTO: si ottengono tutti i cDNA degli RNA presenti in provetta. Se voglio specifico cDNA= PCR
        
        PCR
        
        2 more items...
- - - - frammentazione del DNA genomico
        
        inserimento dei frammenti nei fagi lambda
        
        trasfrormazione batterica
  - - - cromatografia
      - retro-trascrizione in cDNA
        
        cloning--> posizionamento di ogni cDNA in un batterio
  - - - 2- denaturazione del DNA
        
        3- ibridazione tra DNA e membrana
    - - PCR
    - - restriction mapping
        
        caratterizzazione del DNA
        
        mappare i geni
        
        test diagnostici per malattie genetiche
        
        verificare l'orientamento dell'inserto in un DNA ricombinante
      - RFLP
        
        elettroforesi
        
        SOUTHERN BLOT --> identificare un frammento di gene tra tante bande in un gel
        
        probes
        
        colorimetriche = digossigenina
      - elettroforesi
- - - - studiare un gene
    - - studiare regione regolatoria
    - - western blot
        
        presenza /assenza
        
        quantità
      - ibridazione in situ
        
        localizzazione della proteina