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Types de microscopes photoniques en trans-illuminat° - Coggle Diagram
Types de microscopes photoniques en trans-illuminat°
a.fond clair
tissus fixés et colorés
ex ADN
carmin acétique (rose)
carmin ferrique (rose)
feulgen (rose)
vert de méthyle
noir Congo
tissu naturellemt coloré
chloroplaste (vert) (épiderme feuilles de tabac)
vacuole (rose foncée), épiderme bulbe oignon rg)
tissus fixés et immunomarqué
ex microtubules (marquage indirect : augmenter signal
utilsat° Ac 1re anti-alpha-tubuline
utilisat° Ac 2ndr anti-IgG marqué par billes or colloïdal de 20 nm
étude croissance poils staminaux de Tradescantia virginica par Strasburger en 1904
observation mitose par Schaffstein en 1935 : ap colorat° matériel
b;fond noir
voir différentes couleurs échantillon : apporter contrasre
voit rien si pas échantillon car ray pas focaliser au niveau objectifs
seuls les ray diffractés par échantillon sont perçus : ray focalisés sur objectif
express° prot GUS (bêta-glucuronidase)
révélat° par ajout substrat chromogénique X-gluc
produit X = précipité bleu
hybridat° in situ : révéler acides nucléiques
sonde ADN simple brin complémataire
marquage radioactif avc isotope radioactif (p32)
obtenir révélat° par autoradiographie (grains d'argent)
émuls° photographique
observer ARNm révélé car code pr tyrosine hydroxylase
marquage à or colloïdal
AC 1re
Ac 2ndr couplé à particules or colloïdal
intensificat° signal par argent
tissus fixés et immunomarqués
ex: filamt actine
utilisat° Ac 1re anti-actine
révélat° avc Ac 2ndr marqué par billes or colloïdal de 5nm amplifiés à argent
d. contraste de phase (Ph1, Ph2, Ph3)
anneau lumineux entourant échantillon
1933 par Zernicke
but : renforcer contrastes struct très fines, peu visibles en fond noir
principe
augmenter contraste
augmenter efficacité ray diffractés
diminuer ray directs en créant interférences destructives
tirer profit décalages phases introduits par échantillons ds trajets ondes lum et les augmenter
créat° interférences destructives
importance décalage phase introduit par échantillon : 1/4 lambda
méthode
insert° anneau de phase ds condenseur et 1 plaque de phase (entre échantillon et objectif) ds objectif en les superposant
diffract°
vacuole : faible
noy : moyenne
organites : fortes
amplitude lum diffractée pas réduite
retard de phase de l'onde n'est dû qu'à épaisseur échantillon ou indice de réfract°
lum avc 1er anneau de phase
condenseur
objet
objectif avc 2 ème anneau
reconstitut° img intermédiaire
interférences constructives et destructrices
img brillante sur fond peu lumineux
phi = x
arrêt partiel
luminosité réduite
arrêt des ray directs, passage ray oblique = lum fortemt réduite
limites à utilisat°
halo artéfactuel autour contours des détails pouvant gêner observat°
anneau de phase réduit ON objectif dc sa résolut°
échantillons épais donneront mauvais résultats car décalage phases ray traversant au-dessus et en-dessous plan net
rend img confuse et introduit distorsions
c. polarisat°
sans filtre polarisant
plan vibrat° aléatoire
lum incohérente
ampoule électrique
soleil
avc filtre polarisant
plan vibrat° unique
ap polarisat°
en sortie laser
observat° basalte
lum non cohérente puis polariseur
lum cohérente puis analyseur
pas lum
polarisateur
condenseur
platine
objectif
analyseur
struct biréfringentes fibrillaires visibles au cours divis° Cr
e. contraste interférentiel (DIG, Georges Normaski)
impress° de vol car lum est incidente sur 1 côté de l'échantillon
donne impress° relief + vol
favorable à examen échantillon relativemt épais
utiliser lum polarisée (polarisateur)
1er prisme biréfringeant (entre lum et condenseur)
séparat° en 2 faisceaux dt direct° polarisat° à 90° l'1 par rapport à autre
forment angle de 45° avc faisceau incident
sans échantillon
lors recombinaison (2ème prisme ente objectif et analyseur) : direct° polarisat° initiale est reconstituée
= somme vectorielle des 2 faisceaux
direct° polarisat° initiale : modifiée
avc échantillon
si faisceaux traversent échantillon, subissent retards de phase différents selon type mat traversée
lum
polariseur
1er prisme
condenseur
platine
objectif
2ème prisme
analyseur
somme vectorielle des 2 faisceaux
si spécimen : lum change de sens
-lambda 1/2
contraste dépend différences de vit de variat° chemin optique ds échantillon
cf cours microscope
importance
élémts composants microscope
optimisat° éclairemt par diaphragmes
caractéristiques lum et propriétés
éclairage
observer
réflex°
réfract°
absorpt°
diffract°
polarisat°
biréfringence
luminescence
fluorescence
phosphorescence
e. réfringence
entre polariseur et analyseur : échantillon anisotrope = biréfringent (diviser en 2 ray lum pénétrant)
ex : cristaux calcite
entre objectif et analyseur : changemt plan vibrat° onde par passage à travers obj
ex : grain d'amidon en lum polarisée/analysée
couleurs dues aux retards de phases induits