los inhibidores de Plasmodium pk9 promueven el crecimiento de parásitos en etapa hepática.

Resumen

Existe una escasez de herramientas farmacológicas para interrogar la función de la proteína quinasa en los parásitos Plasmodium, el agente causante de la malaria. Entre las proteínas quinasas de Plasmodium, las caracterizadas como atípicas representan dianas farmacológicas atractivas, ya que carecen de similitud de secuencia con las proteínas humanas.

takinib y HS220 disminuyen la ubiquitinación ligada a K63 en P. falciparum, lo que sugiere una inhibición de PfPK9 en las células. Takinib y HS220 inducen un fenotipo único en el que aumenta el tamaño del parásito en los hepatocitos, pero las altas concentraciones del compuesto disminuyen el número de parásitos.

Herramientas utilizadas

Se utilizó Western blot para detectar GFPPfPK9



Se analizaron 3218 compuestos de una biblioteca dirigida a quinasas, de los cuales 304 fueron priorizados

Inmunofluerescencia

Material utilizado

Unión de takinib a PfPK9 en parásitos, monitoreando los cambios en la ubiquitinación de la proteína ligada a K63 en eritrocitos infectados con P. falciparum.

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para examinar si la inhibición de PK9 influye en el tamaño del parásito.

Se evaluó la viabilidad de las células de hepatoma utilizando un ensayo de actividad de proteasa

La viabilidad de la célula huésped no se correlaciona con la inhibición de la carga del parásito.

Conclusiones

Se utilizaron eritrocitos infectados por P.
falciparum

Se sembraron células HepG2 in vitro en monocapa

Células HuH7 infectadas con P. berghei

células recolectadas de E. coli BL21(DE3)

Takinib y otros compuestos de unión a PfPK9 identificados redujeron la carga de Plasmodium en las células del hígado a través de un mecanismo que no implica la muerte de la célula huésped, lo que indica su potencial como sondas para interrogar la biología del parásito.

PfUBC13 como indicador de inhibición de la quinasa en las células

Podría indicar un crecimiento incontrolado
del parásito

Debido

A la interrupción de la señalización celular mediada por PK9 o al papel de PK9 en la regulación de la adquisición de nutrientes.

Algunas proteínas exhiben una reducción dependiente de la dosis de la modificación de ubiquitina ligada a K63 al aumentar el tratamiento con takinib.

Los inhibidores inducen un fenotipo inusual Aumento del tamaño del parásito en los hepatocitos

Medio potencialmente distinto para atacar a Plasmodium