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PRACTICA 6: CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS II; MUESTRAS PROBLEMA
Material
╩1 Micropipeta de 1 ml
╩Puntas de para micropipeta de 1 ml
╩10 tubos de ensayo de 5 ml
╩1 gradilla
╩1 tubo para extracción de sangre humana sin anticoagulante (rojo)
╩1 tubo para extracción de sangre humana con anticoagulante (morado o azul)
╩1 equipo de extraccion vacutainer
╩Papel filtro watman # 40
╩Estufa de incubación
╩1 Embudo Buchner
╩1 Matraz kitazato
╩1 Soporte universal
╩1 pinzas de tres dedos
╩1 Bomba de vacío
╩1 Centrifuga con velocidad de 3500 rpm
╩1 Piceta con agua destilada
Reactivos
╩Reactivo de Biuret
╩Suero humano
╩Plasma humano
╩Dodecilsulfato de sodio (SDS) al 20%
╩NaOH 1MHCl 1 M
Pasos
Pedir al instructor que realice la punción necesaria para obtener sangre total de un voluntario en el equipo. Asegurarse de recolectar las muestras en tubos con y sin anticoagulante (uno rojo y otro morado).
Dejar que la muestra sin anticoagulante (roja) coagule durante un período de 15 minutos.
Centrifugar ambos tubos a una velocidad de 3500 revoluciones por minuto.
Separar el plasma (la parte superior del contenido del tubo morado) y el suero (la parte superior del contenido del tubo rojo) del paquete celular en dos tubos diferentes y etiquetarlos adecuadamente.
Realizar la lectura en un espectrofotómetro.
Preparar el blanco utilizando 2 ml de reactivo de Biuret y 1 ml de agua destilada.
Calibrar el equipo a cero utilizando el blanco como referencia.
En un tubo separado para cada muestra (plasma, suero o extracto celular), tomar 2 ml de reactivo de Biuret y mezclarlo con 1 ml de la muestra correspondiente. Agitar la mezcla con un vórtex y esperar 5 minutos.
Medir la absorbancia de cada muestra y registrar los resultados.
En la práctica de extracción del suero y plasma humano es la importancia de tomar las precauciones necesarias para garantizar la seguridad tanto del estudiante como del voluntario durante la extracción de sangre. Esto incluye el uso de equipo estéril, la disposición adecuada de material punzante y la limpieza y desinfección adecuada de la piel del voluntario antes de la punción. Además, es esencial seguir las normas de bioseguridad y los procedimientos estándar para evitar la contaminación cruzada y prevenir posibles riesgos de infección o lesiones.
La importancia de verificar y documentar la identificación adecuada del voluntario cuya sangre se está extrayendo. Esto suele involucrar la confirmación de datos personales, como el nombre y la fecha de nacimiento, y compararlos con una identificación válida para asegurarse de que se está trabajando con la muestra de la persona correcta. Esta verificación es esencial para evitar errores en la identificación de las muestras y garantizar la integridad de los resultados de la prueba.
FIF 1 Tubo de dextraccion
FIG 2 Dodecilsulfato de sodio
Fig 3 Plasma humano
Fig 5 Espectrofotometro
Fig 5 Basurero de residuos punzantes
