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CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS I: ELABORACIÓN DE CURVAPATRÓN
Materiales y equipo
├2 Matraces Erlenmeyer de 100 ml.
├2 Vasos de precipitados de 100 ml.
├6 tubos de ensaye grandes
├2 Pipetas volumétricas de 2 ml.
├1 Perilla.
├1 Espectrofotómetro.
├2 Celdas para espectrofotómetro
Reactivos
Reactivo de Biuret
Albumina de suero de bovino
Procedimiento
Preparar una solución concentrada de albumina al 2%:
Medir 2 gramos de albumina en una balanza analítica y agregarlos a un matraz de 100 ml.
Añadir 50 ml de agua destilada y agitar hasta que la albumina se disuelva por completo.
Llenar el matraz hasta alcanzar un volumen total de 100 ml (aforar)
Preparar cinco diluciones seriadas con una relación de 1:2 a partir de la solución concentrada:
Primera dilución (1:2): Tomar 5 ml de la solución concentrada y transferirlos a un matraz de 10 ml, luego aforar.
Segunda dilución (1:4): Tomar 5 ml de la solución 1:2 y transferirlos a un matraz de 10 ml, luego aforar.
Tercera dilución (1:8): Tomar 5 ml de la solución 1:4 y transferirlos a un matraz de 10 ml, luego aforar.
Cuarta dilución (1:16): Tomar 5 ml de la solución 1:8 y transferirlos a un matraz de 10 ml, luego aforar.
Quinta dilución (1:32): Tomar 2 ml de la solución 1:16 y transferirlos a un matraz de 10 ml, luego aforar
Preparación del blanco:
Tomar un tubo de ensayo y combinar 2 ml de reactivo de Biuret con 1 ml de agua destilada.
Agitar la mezcla usando un vórtex y esperar durante 5 minutos.
Ajustar la absorbancia del blanco a cero utilizando una longitud de onda de 540 nm en el espectrofotómetro.
Preparación de los estándares:
Usar 6 tubos de ensayo numerados del 1 al 6.
En cada tubo, agregar 2 ml de reactivo de Biuret y 1 ml de la solución concentrada, tomando una muestra de cada una de las diluciones previamente preparadas.
Agitar cada tubo con un vórtex y esperar durante 5 minutos.
Utilizar el espectrofotómetro para leer la absorbancia de cada uno de los tubos a una longitud de onda de 540 nm.
Realizar estas mediciones por triplicado, es decir, repetir el proceso tres veces para obtener resultados más precisos.
Dato curioso
En un estudio reciente sobre la calidad de la proteína en diferentes tipos de alimentos para el consumo humano, se determinó que la cantidad de proteína en una muestra de tofu comercial variaba significativamente entre diferentes marcas. Las mediciones de proteína se realizaron mediante el método espectrofotométrico de Biuret a una longitud de onda de 540 nm. Se encontró que la concentración promedio de proteína en las muestras de tofu de la marca A era de 6.82 ± 0.15 mg/mL, mientras que en las muestras de tofu de la marca B, la concentración promedio era de 7.21 ± 0.12 mg/mL. Estos datos resaltan la importancia de la calidad y la precisión en la fabricación de alimentos y pueden influir en las preferencias de los consumidores y las decisiones de compra.
Espectrofotometro
Un espectrofotómetro ultravioleta-visible (UV-Vis) es una herramienta esencial en la investigación científica y análisis químico. Puede medir la absorbancia de una sustancia en función de la longitud de onda de la luz incidente. Un hecho destacable es que los espectrofotómetros UV-Vis son capaces de detectar concentraciones extremadamente bajas de sustancias, a menudo en el rango de partes por millón (ppm) o partes por mil millones (ppb). Esto les permite ser utilizados en una amplia gama de aplicaciones, como la determinación de la concentración de compuestos en muestras biológicas, la cuantificación de contaminantes en el agua y la caracterización de materiales en la industria farmacéutica y química.
Fig 1 Espectrofotómetro
Fig 2 Albumina
Fig 3 Reactivo de biuret
Fig 4 Matraz aforado
Fig 5 Tofu
Diego Contreras García
ID: 3486542
Matricula: 2730172
