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ELETTROFORESI - Coggle Diagram

- - - - E UN GEL CHE FORNISCE SUPPORTO SOLIDO AI CAMPIONI DA SEPARARE (AGAROSIO O POLIACRILAMMIDE)
  - - - AL CATODO, CARICO NEGATIVAMENTE
        
        COLLEGATI A UN GENERATORE DI CORRENTE
  - - - LE PROTEINE HANNO UNA CARICA VARIABILE, CHE DIPENDE DAL PH DELLA SOLUZIONE IN CUI SI TROVANO.
  - - - LASCIANDO PASSARE + FACILMENTE LE + PICCOLE.
  - - - LE MOLECOLE ANFOTERE + COMUNI E CONOSCIUTE SONO GLI AMMINOACIDI,
  - - - FORMANDO GROSSI IONI, SIA CARICHI POSITIVI CHE NEGATIVI.
    - - IN PARTICOLARE LA VELOCITÀ È INVERSAMENTE PROPORZIONALE ALLE LORO DIMENSIONI.
    - - INFATTI ESISTE UN VALORE DI PH PER CUI LA CARICA NETTA È NULLA (PUNTO ISOELETTRICO).
        
        PARTICELLE CHE HANNO CARICA NULLA NON SI MUOVERANNO.
- - - - STACKING GEL (O GEL DI IMPACCAMENTO):
        
        QUESTO GEL È COSTITUITO DA UN TAMPONE, ACRILAMMIDE E METILENBISACRILAMMIDE, SDS, APS, ACQUA E TEMED
        
        È LA PARTE SUPERIORE DEL GEL E LA SUA FUNZIONE È QUELLA DI CONCENTRARE IL CAMPIONE PROTEICO CARICATO NEGLI APPOSITI POZZETTI,IN MODO CHE TUTTI I CAMPIONI COMINCINO LA LORO MIGRAZIONE DALLO STESSO PUNTO DI PARTENZA.
      - RUNNING GEL (O GEL DI SEPARAZIONE):
        
        È LA PARTE INFERIORE E LA SUA FUNZIONE È QUELLA DI SEPARARE LE PROTEINE DEI VARI CAMPIONI SULLA BASE DEL LORO PESO MOLECOLARE.
        
        È COMPOSTO DAGLI STESSI COMPONENTI DELLO STACKING GEL, MA LA CONCENTRAZIONE DI ACRILAMMIDE VARIA A SECONDA DELLA POROSITÀ DESIDERATA:
    - - QUESTO È IN GRADO DI INTERAGIRE CON LE PROTEINE IN UN RAPPORTO COSTANTE DI 1,4 g DI SDS OGNI GRAMMO DI PROTEINA.
    - - È IL TIPO DI ELETTROFORESI + UTILIZZATO IN BIOCHIMICA ANALITICA,
        
        IN QUANTO PERMETTE DI STABILIRE CON BUONA ACCURATEZZA SIA IL GRADO DI PUREZZA DELLA PROTEINA CHE SI STA PURIFICANDO SIA IL SUO PESO MOLECOLARE
  - - - SI MESCOLANO TUTTI I COMPONENTI TRANNE PERSOLFATO DI AMMONIO E TEMED, SI DEGASSA LA SOLUZIONE SOTTO VUOTO PER 5/10 MIN,
        
        E POI SI AGGIUNGONO QUESTI 2 COMPONENTI CHE SCATENANO LA REAZIONE DI GELIFICAZIONE NELLA SOLUZIONE,
        
        CHE SI VERSA IMMEDIATAMENTE NELLO SLAB LASCIANDONE 1 - 2 ML IN UNA PROVETTA X CONTROLLARE LA POLIMERIZZAZIONE.
    - - E POI QUELLA PER IL X DI IMPACCAMENTO (SUPERIORE).
        
        LA CONCENTRAZIONE DEL GEL DI IMPILAMENTO È DI SOLITO IL 4%.
    - - SI OTTIENE COSÌ UNO SPAZIO DI 1 MM DI SPESSORE A FORMA DI LASTRA RETTANGOLARE (SLAB)
        
        DELIMITATA DAVANTI E DIETRO DAI 2 VETRI,
        
        AI LATI DAGLI SPAZIATORI E IN BASSO DA UNA STRISCIA DI GOMMA.
    - - IN 2 -3 POZZETTI SI CARICANO MISCELE DI PROTEINE A PESO MOLECOLARE NOTO
    - - E SI VERSA SOPRA AL GEL DI SEPARAZIONE
    - - SI RIMUOVE IL PETTINE E SI AGGIUNGE IL TAMPONE PER LA CORSA TRIS-GLICINA SDS NEI RECIPIENTI: INFERIORE (ELETTRODO +) E SUPERIORE (ELETTRODO -).
    - - SI INTERROMPE LA CORSA ELETTROFORETICA QUANDO IL BLU DI BROMOFENOLO CONTENUTO NEL CAMPIONE DISTA POCHI MILLIMETRI DAL BORDO INFERIORE.