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Desarrollo de papas transgénicas Bt para el control efectivo de la polilla…

- - - - 58 °C durante 1 minuto
      - 72 °C durante 1 minuto
      - 94 °C durante 1 minuto
      - Extensión final a 72 °C durante 10 minutos
    - - Se encontro:
        
        Se observó que la expresión más alta del gen cry1Ab se encontraba en los estolones y tubérculos, seguida de las hojas viejas y las hojas jóvenes
        
        No se detectó expresión del gen cry1Ab en el tallo
        
        La técnica de RT-PCR utilizando cebadores cry1Ab resultó en la amplificación exitosa de fragmentos de 700 pares de bases, que corresponden al tamaño esperado, en los tubérculos de 7 de las 10 líneas transgénicas analizadas
  - - - Se encontro:
        
        Se obtuvo una señal de hibridación positiva que correspondía a un transcripto de cry1Ab de 700 pares de bases en todos los tubérculos almacenados
  - - - Se encontro:
        
        La expresión de Cry1Ab en las plantas de papa mostró una variabilidad significativa en términos de resistencia a las larvas de la polilla de los tubérculos de papa
        
        Una línea específica de tubérculos, CG127, se destacó por no presentar daño alguno incluso después de 21 días de exposición a las larvas de PTM, y todas las larvas murieron en esta línea
        
        Alta tasa de mortalidad de las larvas neonatas de PTM, lo que indica una eficacia en la resistencia conferida por la expresión de Cry1Ab.
        
        Los tubérculos no transformados de control mostraron daños extensos después de 21 días de incubación con larvas de PTM
        
        Los tubérculos transgénicos almacenados apenas sufrieron daños por parte de las larvas de PTM
        
        La línea de tubérculos transgénicos CG127 demostró una resistencia excepcional, incluso cuando los tubérculos se almacenaron y se sometieron a una infestación de larvas de PTM durante 21 días
  - - - Desnaturación a 94 °C durante 1 minuto
      - Alineación a 58 °C durante 1 minuto
      - Elongación a 72 °C durante 1 minuto
      - Repetición de ciclos durante 35 veces
      - Extensión final a 72 °C durante 10 minutos
      - Se encontro:
        
        Solo 10 de las 18 líneas positivas para npt II pudieron generar una banda positiva de 1206 pares de bases para el promotor GBSSi
        
        En estas 10 líneas positivas GBSSi/npt II, se detectó la presencia del gen cry1Ab con una banda esperada de 700 pares de bases
        
        Todas las 18 líneas transformadas fueron resistentes a la kanamicina y mostraron un amplicón de 713 pares de bases correspondiente al gen npt II
        
        No se detectaron amplificaciones en las líneas de papa no transformadas para el gen cry1Ab
        
        Dieciocho líneas transformadas mostraron un crecimiento saludable y tuberización en condiciones de invernadero
        
        El análisis Southern reveló que tres líneas tenían un solo evento de inserción de transgen, mientras que en las siete líneas restantes se evidenciaron dos o más eventos de inserción
    - - Desnaturación a 94 °C durante 1 minuto
      - Alineación a 58 °C durante 1 minuto
      - Elongación a 72 °C durante 1 minuto
      - Repetición de ciclos durante 35 veces
      - Extensión final a 72 °C durante 10 minutos