Bisogna attendere 7GG da fecondazione per RACCOGLIERE LE FORMAZIONI. LA RACCOLTA SEGUE IL PROTOCOLLO FLASHING, che prevede il LAVAGGIO UTERINO E RACCOLTA DELLE FORMAZIONI: FASE FINALE DEL PROTOCOLLO DI SUPEROVULAZIONE. La raccolta viene fatta con un CATETERE FLESSIBILE- CATETERE DI FOLEY INSERITO COME IL CATETERE DA INSEMINAZIONE PER VIA VAGINALE, ATTRAVERSA LA CERVICE PER RAGGIUNGERE LA BASE DEL CORNO UTERINO CHE SI DEVE LAVARE. IL CATETERE HA DUE VIE: UNA IN CUI PASSA IL LIQUIDO DI LAVAGGIO E L'ALTRA DOVE PASSA L'ARIA CHE SGONFIA UN PALLONCINO POSTO NELLA PUNTA DEL CATETERE, ESSO SERVE PER FISSARE IL CATETERE ALLA BASE DEL CORNO UTERINO DX O SX, IL PALLONCINO INOLTRE OCCLUDE IL PASSAGGIO DEL LIQUIDO AL DI FUORI DEL CORNO, FISSATO IL CATETERE CON IL PALLONCINO, SI COLLEGA UN TUBO A "T".CHE SERVE ALL'AFFLUSSO E ALL'EFFLUSSO, CHE SI ALTERNANO, DEL LIQUIDO DI LAVAGGIO. IL LIQUIDO CONTIENE SPECIFICHE SOSTANZE TAMPONE CHE CONTENGONO COSTANTE IL PH. L'OPERATORE CON LA MANO NEL RETTO MONITORA IL GONFIAGGIO DEL CORNO UTERINO CHE STA RICEVENDO IL LIQUIDO, QUANDO IL CORNO E' ABBASTANZA GONFIO SI CHIUDE L'AFFLUSSO E SI APRE L'EFFLUSSO, POI SI MASSAGGIA COSI' IL LIQUIDO VA IN CONTENITORI DI RECUPERO CHE HANNO UN FILTRO SPECIFICO PER MANTENERE LE FORMAZIONI. GLI EMBRIONI SONO FRENATI DA FILTRI DI DIVERSE DIMENSIONI, A QUESTO PUNTO SI VALUTANO LE FORMAZIONI RACCOLTE. LE FORMAZIONI SONO CHIAMATE COSI PERCHE' A 7GG DAL MOMENTO STIMATO DI FERTILIZZAZIONE SI HANNO MORULE, MORULE COMPATTE O BLASTOCISTI O UFO(OVOCITI NON FERTILIZZATI) O ZIGOTI(FERTILIZZATI MA MORTI ENTRO 24H PER INCOMPATIBILITA' CROMOSOMICA). ZIGOTE FINO A 7 GG SI DIVIDE PER MITOSI A 24H SI DIVIDE IN 2 CELLULE, MENTRE OLTRE LE 24H CONTINUA LA DIVISIONE FINO A DIVENTARE UNA MORULA. La raccolta viene fatta a 7 GG PER ESSERE SICURI CHE LE FORMAZIONI SIANO GIA' IN UTERO, EMBRIONE ARRIVA IN UTERO GIA' A 4-5GG E A 7GG LE FORMAZIONI SONO FACILMENTE RACCOGLIBILI E TRASFERIBILI. LE MORULE PRECOSI E LE BLASTOCISTI ESPANSE MEGLIO TRASFERIRLE A FRESCO. NEL CASO BLASTOCISTI ESPANSA E' MEGLIO LA VITRIFICAZIONE AL CONGELAMENTO PERCHE' SI HA ZONA PELLUCIDA SOTTILE PER LA PRESSIONE DEL LIQUIDO E CON CONGELAMENTO C'E' PIU' PROBABILITA' SI ROMPA. MENO ACQUA PIU' FACILE CONGELAZIONE , TANTA ACQUA MEGLIO VITRIFICAZIONE O TRASFERIMENTO DIRETTO COSI NON SI DANNEGGIANO LE CELLULE. MORULA COMPATTA HA CELLULE COMPATTE E POCO LIQUIDO PERCIO' E' UNA FORMAZIONE MAGGIORMENTE CONGELABILE.
- 1° stadio di MORULA: >256 BLASTOMERI INTORNO AL 5°GG
- MORULA COMPATTA: 6° GG DI VITA DELL'EMBRIONE
- BLASTOMERI: 6° GG E MEZZO/ 7°GG, SONO CELLULE NON ANCORA SELEZIONATE PER DIVENTARE UN ORGANO MA DERIVANO DALLA DIVISIONE DELLO ZIGOTE
- BLASTOCISTI: INIZIANO A DIFFERENZIARSI IN CELLULE EMBRIONALI VERE E PROPRIE E IN CELLULE TROFLOBLASTICHE CHE COSTITUIRANNO LA PLACENTA. LE CELLULE TROFLOBLASTICHE PRODUCONO LIQUIDO E SI FORMA UNO SPAZIO INTERNO DETTO BLASTOCELE. LA FORMAZIONE INTERA E' CHIAMATA BLASTOCISTI RICONOSCIBILE PERCHE' HA IL BLASTOCELE
DALLO ZIGOTE ALLA BLASTOCISTI C'E' LA PRESENZA DELLA ZONA PELLUCIDA. EMBRIONE DEVE ESSERE VENDUTO CON LA ZONA PELLUCIDA INTATTA , NON SI PUO' MAI VENEDERE UNA BLASTOCISTI SCHIUSA OVVERO CON ZONA PELLUCIDA ROTTA. LA MORULA COMPATTA E LA BLASTOCISTI SONO LE MIGLIORI DA VENDERE PER IL TRASFERIMENTO DOPO IL CONGELAMENTO. IN 12H PERO' LE BLASTOCISTI DIVENTANO ESPANSE: LA ZONA PELLUCIDA C'E' ANCORA MAIL BLASTOCELE LIQUIDO SI E' INGRANDITO E HA ESPANSO LA ZONA PELLUCIDA FACENDOLA DIVENTARE PIU' SOTTILE
A 8GG SI HA LA ROTTURA DELLA ZONA PELLUCIDA, L'EMBRIONE VERO E PROPRIO NON E' VENDIBILE E NON HA SENSO VENDERLO PERCHE' ESSO HA UN BASSO TASSO DI FERTILITA' . AL MAX CON UN EMBRIONE VERO E PROPRIO SI PUO' AL MASSIMO FARE UN TRASFERIMENTO A FRESCO
DOPO IL FLASHING SI VALUTANO LE FORMAZIONI RACCOLTE E SE SI VEDE CHE CI SONO TANTI EMBRIONI MORTI (A 2 A 4O A 16 CELLULE) CHE HANNO CAUSATO L'ARRESTO DELLA LORO CRESCITA VUOL DIRE CHE E' STATO FATTO QUALCOSA DI SBAGLIATO NEI 7 GG E IN PARTICOLARE NELLE PRIME FASI
VALUTAZIONE DI QUALITA' DI RACCOLTA VIENE FATTA CON STEREOMICROSCOPIO: LA LUCE DEL MICROSCOPIO E' CONCENTRATA IN UN PUNTO E IL CONTRASTO CON IL MATERIALE CI DA' L'IDEA DELL'OGGETTO OSSERVATO, MENTRE LO STEREOMICROSCOPIO HA UNA LUCE PIU' LARGA che permette di vedere le STRUTTURE TRIDIMENSIONALMENTE GRANDI. LO SPERMATOZOO DEVE ESSERE PICCOLO E PIATTO CON DNA CONCENTRATO MENTRE OVOCITA GRANDE E ROTONDEGGIANTE(150VOLTE PIU' GRANDE DELLO SPERMATOZOO)