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MÉTODO DE ANÁLISIS DE PROTEÍNAS
Las proteínas son macromoléculas compuestas de aminoácidos unidos por enlaces peptídicos. Existen alrededor de 300 aminoácidos pero el ADN únicamente codifica 20 aminoácidos.
Nitrógeno total:
mide el nitrógeno enlazado químicamente en la muestra. El método se puede aplicar a varias muestras biológicas, incluso plasma
y orina.
Plasma: se mide la proteína total y los compuestos de nitrógeno no proteínico, como la urea y la creatinina.
El método de análisis de nitrógeno total emplea quimioluminiscencia.
Proteínas totales
: La muestra que más se usa para determinar la proteína total es suero y no plasma.
Kjeldhal
. Es el método clásico para la cuantificación de proteína total. Debido a que es preciso y exacto. Casi no se usa en laboratorio porque es tedioso y tardado.
El intervalo de referencia para la proteína total sérica es
6.5 a 8.3 g/dl (65 a 83 g/L) para adultos ambulatorios
Refractometría.
es útil cuando se requiere un método rápido que requiere un pequeño volumen de suero. Es rápido y simple.
Biuret
: Es el método más utilizado y el que recomienda el grupo de expertos de la International Federation oj Clinical Chemistry para la determinación de proteína total. Es el método de rutina.
Enlace de colorante:
Se basan en la capacidad de la mayor parte de las proteínas del suero para unirse con colorantes, aunque podría variar la afinidad con la que se enlazan. Los colorantes mas utilizados son: azul de bromofenol, Ponceau S, negro de amido 10B, verde de lisamina y azul brillante de Coomassie. este método sigue en investigación
Fraccionamiento, identificación y cuantificación de proteínas específicas:
Es útil para determinar la fracción de albúmina y las globulinas. Las globulinas se calculan al restar la albúmina de la proteína total (proteína total/albúmina = globulinas).
Fraccionamiento de sales
. El fraccionamiento de proteínas ha sido realizado mediante varios procedimientos con precipitación. Las globulinas se pueden separar de la albúmina mediante salificación con sales de sodio.
Enlace de colorante:
Los métodos más comunes para la determinación de albúmina. Los colorantes mas utilizados son: anaranjado de metilo, 2-4’-hidroxiazobenceno-ácido benzoico, verde de bromocresol y púrpura de bromocresol (este es opcional).
Determinación de globulinas totales:
Es otro modo de fraccionar proteínas. La albúmina se puede calcular por sustracción de la globulina de proteína total. La concentración de globulina total en suero se determina mediante un método colorimétrico directo con ácido glioxílico.
Electroforesis:
la electroforesis separa las proteínas con base en sus densidades de carga eléctrica.
Es un método exacto; da una visión general de los cambios relativos en diferentes fracciones de proteína
Electroforesis de proteína sérica
Electroforesis capilar
Electroforesis proteínica de alta resolución
Método de turbidimetria
Se suele utilizar para soluciones concentradas (una buena disminución de la luz transmitida)
Ej. Determinacion de proteinas totales en Suero, LCR u Orina (haciendo que las proteinas precipiten con TCA o acido sulfosalicilico)
Metodo de la Ninhidrina
Metodo relativamente rapido. La presencia de pequeñas cantidades de aminoacidos, peptidos, aminas primarias y amoniaco ocasionan una sobreestomacion del contenido proteico.
El color caria con la diferente composicion de aminoacido en el metodo
Bradfort
Es un metodo rapido (2 minutos) sensible. Mide proteinas o peptidos con una masa molecular aproximadamente o igual o mayor de 4,000 Dalton.
Metodo de Acido bicinconinico (BCA)
Se basa en el principio de que las proteinas reducen los iones cupricos a iones cuproso bajo condiciones alcalinas, los iones cuproso reaccionan con el BCA (verdoso) para formar un color morado.
El color formado es proporcional al contenido proteico de la muestra
Metodo de biuret
Formacion de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los grupos NH de los enlaces peptidicos en medio basico. 1Cu2+ se acompleja con 4NH. La intensidad de coloracion es directamente proporcional a la cantidad de proteinas (enlaces peptidicos) y la reaccion es bastante especifica, de manera que pocas sustancias interfieren.
Sensibilidad del metodo es muy baja y solo se recomienda para la cuantificacion de proteinas en preparados muy concentrados (por ejemplo en suero)
Integrantes
Lisbeth Odalys Supic Itzep. 2200-18-716
Miriam Yulisa Sis Rosales. 2200-17-9213.
Fermin Regalizo 2200-19-871
