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Qual a importância da detecção de endotoxinas e pirogênios na indústria…
Qual a importância da detecção de endotoxinas e pirogênios na indústria farmacêutica?
DEFINIÇÃO
Pirogênio
A reação pirogênica é desencadeada pela presença de soluções contaminadas com endotoxinas ou produtos de degradação proteica no sangue do paciente
Palavra grega
pyro
= ardente ou fogo
Descrição adequada para substâncias que produzem elevação da temperatura do corpo
Substâncias que atuam no centro termorregulador do hipotálamo e induzem febre
Podem ser encontrados em:
injetáveis (intramuscular e endovenoso)
correlatos ligados a injetáveis
qualquer produto implantado (fluidos para perfusão e
infusão)
Endotoxinas
É uma substância ligada à parede celular de microrganismo com o propósito de manter a sua integridade. Estas só são liberadas após a destruição da membrana externa.
Podem conter lipídeos, carboidratos e proteínas, porém
quando purificadas são denominadas de lipopolissacarídeos (LPS)
Significativa fonte de pirogênio para a indústria
farmacêutica
Uma das maiores preocupações na indústria biofarmacêutica de um modo geral é o problema da contaminação por endotoxinas (LPS)
Principalmente por suas consequências à saúde humana, já que são capazes de gerar febre, inflamação e até morte, caso seus níveis não estiverem dentro dos padrões estabelecidos
Devido a seus efeitos biológicos in vivo e in vitro, sua detecção e remoção são essenciais para a administração parenteral segura dos produtos injetáveis
DETECÇÃO
O teste de pirogênio determina a presença de endotoxinas bacterianas
É obrigatório para produtos injetáveis e determinam os riscos
de uma possível reação pirogênica em pacientes receptadores do produto injetado
Pode ser
IN VIVO
ou
IN VITRO
Métodos de ensaio
Gel-Clot (End-Point)
DESVANTAGENS:
baixa sensibilidade
VANTAGENS:
fácil execução, baixo custo e não requer equipamentos
Turbidimétrico (End-Point e Kinetic)
VANTAGENS:
quantitativo e alta sensibilidade (em relação ao Gel-clot)
DESVANTAGENS:
alto custo dos reagentes e sofre interferência de amostras coloridas
Cromogênico (End-Point e Kinetc)
VANTAGENS:
quantitativo e alta sensibilidade (em relação ao Gel-clot e turbidimétrico)
DESVANTAGENS:
alto custo dos reagentes
Coagulação em Gel
Método mais simples e amplamente usado para detecção de endotoxinas
Método semi-quantitativo
A técnica da coagulação em gel permite a detecção e quantificação de endotoxinas baseada na reação de gelificação do reagente
É dependente da concentração de endotoxina, temperatura e pH
Metodologia
2- A mistura homogeneizada é incubada em banho de água a 37ºC por 1h
3- O ponto final da reação é facilmente verificado pela remoção dos tubos e inversão a 180º
1- Volumes iguais de reagente LAL e da solução a ser analisada são transferidos a tubos de ensaio
4- A presença do gel que se mantém sólido durante a inversão é
considerada positiva para endotoxinas.
ALUNAS: Emmili França, Martha Andrade e Sara Coelho