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TP4 : Analyse ADN par digest° enzymatique et électrophorèse en gel d'…
TP4 : Analyse ADN par digest° enzymatique et électrophorèse en gel d'agarose
enz de restrict° = coupe ADN à site de restrict°/site palindrome
HPA1 = coupure franche
risque plasmide ds mauvais sens
EcoRI = coupure bord cohésive
oblige sens plasmide
utilisé XbaI et ECOR1 pr "couper"
pr insérer gène sans le couper ds plasmide
utiliser sites absents
enz lygase
pr intégrer plasmide
phén de recombinaison
électrophorèse = séparer mol acides nucléiques en fonct° de leur taille
plus gros = + tps
m^ taille à m^ posit°
incuber gel avc bromure d'éthidium (BET) sous UV
fluorescence orange s'intercalant entre plateaux de pb
digestion
simple = tj 1 fragmt de m^ taille
dble = 2 fragmts
doit ê à 37° sinon incomplète
courant + pr attirer ADN vers bas
migrat° horizontale
identifier fragmts ADN obtenus par coupures avc enz de restrict°
plasmide non digéré
prendre différentes conformat° = superenroulemt
pls bandes à tailles > aux 4 kb attendues ici