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Expresión génica, inicio transcripcion, elongacio0n trans, terminacion arn…

- - - - aislar pequeños fragmentos de ADN q contengan los genes a clonar
      - preparación de vector de clonación
      - unión del ADN con vector de clonación y formación de ADN recombinante
      - introducción de ADN recombinante en célula anfitriona
      - detección + selección de clones recombinantes
      - propagación del cultivo
  - - - terapia génica
        
        sustituir genes alterados
        
        inhibir o contrarrestar efectos dañinos
        
        insertar genes nuevos
      - fabricación de productos farmacéuticos
    - - conocer secuencia de bases de todo el ADN
      - obtener mapa genético de cromosomas
      - secuenciar cada gen
      - determinar función de genes
- - - - En eucariotas, tras añadir 30 nucleótidos, en extremo 5' se añade m-GTP que sirve como señal para inicio de traducción y protege ARNm de posible degradación
      - ARN polimerasa lee la cadena molde en sentido sentido 3'-5' y añade nucleótidos de ARN en sentido 5'-3' respetando la complementariedad entre nucleótidos de ADN y ARN
    - - cuando el ARN polimerasa lee la secuencia de terminación de ADN, abandona la transcripción y el ARN obtenido se separa
      - En procariotas, secuencia de terminación= secuencia polindrómica (= de der-izq q de izq-der)
      - En eucariotas, secuencia de terminación= TTATTT y al separarse el ARN se añade al extremo 3' 200 nucleótidos de adenina (cola poliA)
    - - En eucariotas, al centro promotor también se unen factores de iniciación
      - La ARN polimerasa debe localizar el centro promotor (alejada del pto. de iniciación de transcripción) para luego desenrollar 1 vuelta de la hélice de ADN, separar las 2 hebras y abre una burbuja de transcripción
    - - procariotas
        
        ARN resultante tiene sentido y puede funcionar como ARNm (pero no ARNt o ARNr)
      - eucariotas
        
        se obtiene transcrito primario (ARN sin sentido) que pasará por splicing para cobrar sentido. El proceso consiste en dividir el fragmento en exones e intrones para luego eliminar los intrones y enlazar los exones restantes. ARNm eucariotas = m-GTP (extremo 5'), cola poliA (extremo 3') y exones en medio
- - - - Activación de los aa: unión del aa al extremo 3' del ARNt con co sumo de ATP por la enzima aminoacil-ARNt-sintetasa (específica cada aa): Resulta en complejo de tranferencia (ARNt con aa)
    - - para que se inicie, deben ocurrir 2 señales de iniciación
        
        caperuza m-GTP: GTP se hidroliza y la E liberada sirve oara unir ARNm a subunidad menor de ribosoma (complejo de iniciación)
        
        codón iniciador AUG se le unirá su ARNt, incorporando Met como 1º aa
      - Tras las señales, se une la subunidad mayor del ribosoma quedando el ARNt con Met en sitio P, y sitio A libre para nuevo ARNt con aa
    - - incorporación de aa en 3 pasos
        
        nuevo ARNt con aa se une al sitio A
        
        aa del sitio P se libera de su ARNt y establece un enlace peptídico con aa del sitio A
        
        ribosoma se desplaza 1 codón + provocando que el ARNt sin aa se desplace al sitio E y salga del ribosoma, el ARNt con pequeño péptido se desplace a sitio P, sitio A quede libre para iniciar otro ciclo de elongación
      - enzimas implicadas= factores de elongación
- - - - tipos de codones
        
        iniciador (AUG y codifica para metionina)
        
        sinónimo: con sentido q codifican para = aa
        
        con sentido: codifican para incorporar aa (hay 61 combinaciones)
        
        terminación: no codifican para aa y dn orden de ifnalizar traducción (UAG, UGA, UAA)