Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
Electrophorèse protéines sériques - Coggle Diagram
Electrophorèse protéines sériques
Introduction
= séprat° prot en f° de leurs charges et de leur tailles dn champs électrique
Dn sérum il y a + 300 prot mais électrophorèse ne permet d'étudier que prot les + exprimé, se divise en 5 à 6 fract°
Intérêt -> analyse qualitative et semi-quantitative des prots pr voir si prot st sous ou sur-exprimées -> présence pathologie c syndrome inflammatoire, hépatopathie, dénutrit° et hémopathies malignes
Examen 1er intent° car rapide à réaliser ce qui permet de rendre résultat en 1 journée, simple car automatisé pas cher et permet si besoin de déboucher sur analyses complémentaires
Sérum obtenu après prélèvement sur tube sec (bouchon jaune) et contient activateur coagulat° permet la transf fibrinogène en fibrine (insoluble) -> après centrifugat° le surnageant = sérum
Plasma prélevé dn tube contenant anticoagulanr
Peut faire dosage prot avec méthodes colorimétriques -> analyse semi-quantitative
L'albumine est prot + exprimé -> 60% prot sériques et on va retrouver prot de diff concentrat° pr certaines de ordre du microgramme
Ex :entre albumine et IgE, il y a une échelle 10^5
Sur gel agarose
Dépose dn cupules de support (gel agarose) qq microlitres de sérum et applique champ électrique ce qui permet au prit migrer vers anode
Prot st chargés négativement par tampon pH basique
Tps de migrat° 45 mins
Fixe prot pr qu'elles restent sur gel et on les colore avec rouge ponceau ou amidoschwarz puis décolore plaque obtient résultat
Séparation en 5 grandes fractions : (alpha 1 et 2, bêta 1 et 2 et Ig) -> bande migre + vers anode = albumine bande + intense car présente en forte qtt
Bande + diffuse qui migre vers anode est Ig -> IgM, IgG et IgE
Toutes ces protéines sont synthétisées par foie sauf Ig qui sont prod par LB
Automatisé => appareil peut analyser 7 échantillons diff, il quantifie fract° ar lecture densitométrique càd mesure intensité de chaque bande permet obtent° électrophorèse gamma + mesure aire sous courbe de chaque fract° -> resultat en g/L ou %
Estime en g/L la concetrat° de chaque fract° car connait concetrat° tot et % chaque fract° -> en multipliant nb prot tot par % de chaque fract° on obtient concetrat° en g/L de chaque fract° = analyse semi-quantitative
Résultats en g/L données pr concentrat° en prot sériques normales càd entre 60 et 80g/L mais si concentrat° est inf à nome exprime résultat en %
Electrophorèse capillaire
= sépérat° prot sériques dn capillaires qui sont structures en silices donc fines -> à int de ces capillaires, il y a gpt silanols qui sont chargés - si on les met dn tampon pH très acide
Fait passer tampon dn ces capillaires qui contient charges + et injecte sérum du patient
Lorsqu'on met diff de potentiel de part et autre des capillaires -> charges + tampon migrent vers cathode => entrainent prot patient -> créat° courant électroendosmose qui va permettre de séparer prot en diff fract°
Automatisé -> prelève dn chaque tube et dépose dn capillaires, prélèvements patients -> 8 capillaires => peut faire analyse simultanée de 8 patient
Effet Peltier -> maintient T° 35,5°C pr éviter précipitat° des cryoglobulines
Syst de détect° à extrémuté du capillaire qui permet à 200nm de reconnaiter les li peptidiques => quantifier prot en mesurant densité optique à 200 nm -> densité optique est proportionnelle à concentrat° des prot
Syst très rapides -> peut analyser jusqu'à 80 échantillons/heure
Pas même type de séparat° que sur gel agarose -> reconstitue l'ordre à laquelle sortent fract° c pr électrophorèse même si en réalité, fract° ne sortent pas dn cet ordre -> peut voir séparat° en 6 fract° -> fract° bêta est divisé en bêta 1 et 2 et gamme représente les Ig
Paroi capillaire de silice est tapissée de gpts silanols, qui s'ionisent > pH 2, surface capillaire devient alors -, cat° de électrolyte viennent se placer à surface de silice et forment double couche diffuse
Dès qu'on applique champ électrique, cat° double couche se mettent en mvt vers cathode et entraînent mol échantillons -> flux électro-endosmotique, prépondérant dn ce type électrophorèse
Syndrome inflammatoire
Mécanisme mis en place en cas lésions tissulaires -> origine physique, chimique, infectieuse et endogène
Signes locaux -> rougeur, chaleur, œdème et douleur
Signes généraux (si inflammat° est systémique) -> fatigue, amaigrissement, anorexie, asthénie et hyperthermie/hypothermie
Majoritaire chez patients aux urgences
Du aux cytokines pro-inflammatoires (TNF-alpha, IL-1, IL-6) qui sont libérés au niveau locale ou dn circulat°
Act° locale trad par apparit° 4 signes locaux qui sont dus à une augmentat° perméabilité vasculaire à infiltrat° des cell immunitaires, passage plasma dn tissus (œdème)
Cytokines régulent foie pr synthèse de prot pro inflammatoire = PRI -> prot dt concentrat° varie de 25% en + ou - pdt1ere semaine + agissent sur libérat° de neurotransmetteurs au niveau SN ce qui induit douleur + fièvre, asthénie, amaigrissement et manque appétit
Prot dt synthèse est stimulée par inflammat° st PRI+ et celles dt synthèse est inhibée par inflammat° PRI-
Bcp prot augmentent
Alpha antitrypsine -> repérée après électrophorèse dn fract° alpha1globuline -> voit augmentat° fract° alpha1 après électrophorèse
Orosomucoide -> PRI+ qui migre dn fract° alpha 1
Haptoglobine -> PRI+ présente dn fract° alpha2globuline -> augmentat° fract° aplha2
Albumine -> PRI- => synthèse est inhibée par inflammat° -> diminut° proport° albumine par rapport aux prot totales
Transferrine -> PRI- migre dn fract° bêta-> petite diminut°
Haptoglobine -> peut se complexer à hémoglobine libre en cas hémolyse intra vasculaire -> càd lorsque GR sont fragilisés => éclatent et libèrent Hb qui se combine vite à haptoglobine. Ce complexe vite éliminé par syst endothélial => diminut° haptoglobine
Albumine -> transp général de subst endogènes et exogènes dn circulat° + rôle dn pression oncotique, situat° pathologiques où on a pertes albumine au niveau urinaire et digestif -> peut avoir carences apport en cas dénutrit°
Transferrine -> augmente en cas carence martial -> sur exp de transferrine pr capter peu de fer par alimentat°. Si sd inflammatoire + carence -> pas variat° fract° bêta
Orozomucoide et haptoglobine -> concentrat° augmentent rapidement au bout 2-3 jours et ensuite normalisat° concentrat° au bout 1 semaine s'il y résolut° sd inflammatoire mais si il persiste concentrat° prot persistent.
Haptoglobine et alpha antitrypsine ont cinétique diff en f° syndrome inf -> càd si on est au début, au milieu ou à la fin syndrome inflammatoire -> fract° st soit augmentées, normales ou diminuées
Ex tracés électrophorèse
Profil normal -> 6 fract° diff -> albumine + imp, alpha 1 et 2, bêta 1 et 2 et gamma -> concentrat° en prot tot st normales = 66g/L
Syndrome inflammatoire aigu -> augmentat° fract° alpha1
Syndrome inflammatoire chronique -> diminut° albumine car c'est PRI-, prot tot st normales = 72g/L et albumine très abaissée soit 22g/L au lieu de 40g/L => diminué synthèse albumine par foie
Augmentat° fact° a1 et a2 -> fract° PRI+ + augmentat° fract° gamma => Ig
Si augmentat° ts Ig -> augmentat° polyclonale => répartit° en dômes
Si augmentat° monoclonale -> pic très fin fract° gamma -> pic monoclonal est dû à LB qui prolifère
Fract° alpha-1 globuline
Alpha 1 anti-trypsine (AAT) -> fract° alpha1 globuline -> Inhibiteur de protéase notamment l’élastase dn PNN, synthèse hépatique.
Diff allèles -> co-exp des 2 allèles : allèle maternelle et paternelle
Phénotypes + fréq est ceui qui donne valeurs normales -> génotype MM
Génotype ZZ ou SZ est lié à diminut° ATT -> 10% valeurs usuelles càd ATT en faible concentrat° -> conduit atteintes pulmonaires et hépatiques
Niveau pulmonaire -> destruct° lobules qui contiennent PNN qui détruisent agents infectieux auxquels sont exposés poumons
PNN libère libère élastase qui vient détruire pathogènes mais aussi tissu san
Si diminut° ATT -> on n'a plus inhibit° élastase ce qui provoque atteintes respiratoires chronique du destruct° tissu sain
Atteintes hépatiques -> destruct° hépatocytes qui sont remplacés par tissu fibreux ce qui provoque cirrhose => insuffisance hépatocellR
Si patients ont génotype SZ ou ZZ -> électrophorèse diminut° fract° alpha1
Sd inflammatoire -> c ATT est PRI+ alors sa concentrat° va augmenter -> arriver valeurs normales pr ces patients au génotype SZ ou ZZ 6> passer à côté de valeurs abaissées de alpha antitrypsine -> pr confirmer ce déficit en ATT -> faut faire électrophorèse en dehors inflammat°
Hépatopathies
Diminut° de tte fract° sauf gamma
Seules prot de fract° gamma ne sont pas prod par hépatocytes mais bien par LB
Voit aussi bloc beta2/gammaglobuline qui fait que les fract° bêta2 et gamme ne sont plus séparées
Si on observe bloc b2/gamam et diminut° de toutes fract° sauf gamma -> hépatopathie
Fract° alpha-2 globuline
Alpha-2 macroglobulie est inhibiteur de protéase constituée de 4 SU et fait + de 800kDA, synthèse hépatique et syst RE
Syndrome néphrotique -> fuite anormale des prot dn urines due à anomalie du glomérule qui est anormalement perméable -> protéinurie => hypoprotéinémie et hypoalbunémie
En cas syndrome néphrotique -> prot passent glomérule qui va être anormalement perméable c alpha2 macroglobuline qui a poids très élevé, passe pas glomérule => retenue => alpha2 macroglobuline augmente
Lorsqu'on fit une électrophorèse -> diminut° plupart des fract° qui passent filtre glomérulaire -> alumine, a1, b1 et b2
Si observe niveau fract° alpha2 -> 2 pics cela est dû à variant de haptoglobuline -> pas état pathogène c'est physiologique