Métodos de estudio aplicados a proteínas
Métodos
Las proteínas se pueden cuantificar directamente mediante absorbancia a 280 nm, o indirectamente mediante métodos colorimétricos (BCA, Bradford, etc.) o fluorimétricos que ofrecen ventajas como una mayor sensibilidad.
Las proteínas son biomoléculas formadas por aminoácidos que realizan funciones especificas
NEFELOMETRÍA
INMUNODIFUSIÓN
ELECTROFORESIS
INMUNOELECTROFORESIS
Mide la luz dispersada en dirección distinta a la luz. Utiliza como instrumento el nefelómetro.
Se basa en la formación de bandas de precipitación Ag-Ac en medios semisólidos.
Técnica para la separación (y posterior cuantificación) de proteínas es la electroforesis (técnica en la cual una partícula cargada se hace desplazar a través de un medio aplicando un campo eléctrico).
Es una inmunodifusión en la que se aplica una corriente eléctrica para separar las proteínas de la muestra.
FILTRACION DE GEL
Técnica que se basa en la difusión de las moléculas a través de los poros de una matriz
de gel en una columna.
Esta metodología es útil para separar grandes cantidades de proteínas. Se pueden
separar proteínas de alto peso molecular de otras de bajo peso, pero la resolución es mucho más baja que en la
electroforesis en gel.
Isoelectroenfoque o electroforesis
en dos dimensiones (2D)
Metodología permite identificar proteínas de interés que pueden ser sometidas a secuenciación para la identificación del tipo de proteína así como para el diseño de oligonucleótidos para hacer pruebas de reacción en cadena de la polimerasa para diagnóstico, clonación de genes, o ambas cosas
Cromatografía de intercambio iónico
Se en la interacción electrostática entre una proteína cargada positiva o negativamente con una partícula fija de resina de intercambio iónico/catiónico que tiene una carga opuesta.
Cromatografía de afinidad
se basa en la alta afinidad
que presentan muchas proteínas por grupos químicos específi cos de otras moléculas.