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TERAPIA GENICA - Coggle Diagram

- - - - fase 1: ricombinasi + sequenza specifica (= sito di ricombinazione), taglio di catena di DNA con leg dell'enzima di tipo fosfotirosinico
        
        fase 2: catene di uniscono formando intermedio di Holiday
        
        fase 3-4: rigenerazione del sito di ricombinazione
  - - - trasposoni semplici = sequenze per trasposizioni e geni delle trasposasi
      - trasposoni complessi = presentano geni sovrannumerari che es danno resistenza agli antibiotici
  - - - proteina con ripiegamento che porta a riconoscimento di triplette e si possono legare più zinc fingers = forbici molecolari altamente specifiche
        
        rapida distribuzione in locus, mutazioni permanenti, meccanismo attivo, non necessaria selezione con antibiotico
    - - presentano
        
        regione amminoterminale (dominio di traslocazione)
        
        regione centrale composta da tandem repeats
        
        RVD = aa in pos 12 e 13 che mediano il riconoscimento di uno specifico nucleotide
        
        regione carbossiterminale con nuclear localization signal + dominio effettore
        
        aa in 12 stabilizza il loop interagendo con alfa elica minore (alanina pos 8) oppure si ha interazione tra tale-DNA per aa in pos 13 che interagisce con nucleotide con leg H o interazioni van der Whaals
        
        TALE design più semplice in cui il nucleotide riconosciuto (prima della sequenza target) è TIMINA
        
        ZEP ha design complicato
    - - CAS 9 taglia il filamento. ingegnerizzazione che riconosce una sequenza specifica del nostro genoma e si taglia con sicurezza.
        
        approccio di taglio sicuro
        
        cas modificate che eseguono taglio sul singolo filamento per inserzione di sequenza di DNA + lunghe
        
        PAM = affinché cas distrugga la sequenza è necessario per attivare cas
      - uso di virus e liposomi
      - uso in immunodeficienze primarie, malattie degenerative, malattie autoimmuni, patologie neuromuscolari
- - - - iniezione DNA nudo (economico ma poco efficacie)
      - elettroporazione = creazione di pori con scariche elettriche (+ efficacie ma comunque ancora non abbastanza)
      - gene gun (ridotta efficacia)
      - liposomi (inserimento di lipoproteine che sono riconosciuti da rec che indirizzano il liposoma verso specifici tessuti)
    - - sfrutto capacità dei virus di integrarsi nel DNA per es con creazione di plasmide ricombinante con gene terapeutico per agire su un target specifico
      - limite :warning:
        
        costosi e immunogenici
      - anche uso di adenovirus associati con due plasmidi
  - - - = blocco del differenziamento dei linfociti T e NK con = trattamento di ADA-SCID sospeso per sviluppo nel 25% dei pz di leucemia letale per inserzione del vettore in locus di protooncogene
- - - - = mutazione sull'enzima lisososomiale arilsulfatasi A e porta ad accumulo di esteri solfamici dei galattocerebrosidi
        
        sulfatidi portano a demielizzazione e perdita di funzioni motorie e cognitive
      - trattamento con LIBMELDY che ha pop arricchita di cell autologhe CD34+ che contiene cell staminali progenitrici di cell emopoietiche trasdotte in vivo con vettore lentivirale che codifica per gene arilsulfatasi A
  - - - LUXTURNA = iniezione unica nella parte posteriore di entrambi gli occhi con vettore AAV2 + assunzione di farmaci immunosoppressori 3 gg prima dell'iniezione
    - - zolgesma (necessari test pre somm del farmaco es bilirubina tot, alanina e aspartato amminotransferasi ecc )