Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
ESPECTROMETRÍA UV-VISIBLE VALIDADA UTILIZANDO AGUA COMO DISOLVENTE PARA LA…
ESPECTROMETRÍA UV-VISIBLE VALIDADA UTILIZANDO AGUA COMO DISOLVENTE PARA LA DETERMINACIÓN DE CLOROQUINA EN MUESTRAS DE COMPRIMIDOS
INTRODUCCIÓN
El fosfato de cloroquina (CQ) es un fármaco antipalúdico que se absorbe rápida y casi completamente a través del tracto gastrointestinal
Es el prototipo de fármaco antipalúdico sintético más utilizado para tratar todos los tipos de infecciones palúdicas y, cuando se administra por vía oral, suele ser bien tolerado y eficaz.
El fosfato de cloroquina tiene una marcada y rápida actividad esquizontocida contra todas las infecciones
de
Plasmodium malariae
Plasmodium ovale
Plasmodium falciparum
Plasmodium vivax
También está indicado para el tratamiento de la amebiasis extraintestinal
El método oficial de la Farmacopea Británica (BP) para la determinación del fosfato de cloroquina a partir de la formulación de comprimidos farmacéuticos es la valoración potenciométrica
Ambos métodos oficiales requieren la extracción de cloroquina base de las muestras de comprimidos utilizando cloroformo, que es un producto químico caro y cancerígeno, además de un largo procedimiento para el tratamiento de las muestras antes del análisis.
El método oficial de la Farmacopea de los Estados Unidos (USP) es el método espectrofotométrico UV-Vis
Existen muchos métodos analíticos para la cloroquina
como
Espectrofluorimetría
Espectrofotometría
HPLC
Cromatografía de gases
Tanto los métodos oficiales como los demás métodos descritos requieren mucho tiempo, no son respetuosos con el medio ambiente y son poco rentables.
Muchos de los métodos descritos implican varios pasos, lo que los hace tediosos y lentos para el análisis rutinario de control de calidad del fármaco a partir de sus formulaciones farmacéuticas en laboratorios de fabricación y reguladores.
Los disolventes y reactivos que utilizan estos métodos son caros y/o peligrosos para el medio ambiente
OBJETIVO
Desarrollar un método analítico espectrofotométrico UV-Vis validado
Sencillo
Que ahorre tiempo
Sea respetuoso con el medio ambiente
Rentable para la determinación cuantitativa del fosfato de cloroquina en sus formulaciones farmacéuticas en comprimidos utilizando agua como disolvente
MATERIAL Y MÉTODOS
Productos químicos
Los reactivos y productos químicos utilizados eran de grado analítico y se utilizaron sin purificación adicional.
Se utilizaron
Ácido clorhídrico, Ácido sulfúrico, El ingrediente farmacéutico activo en la formulación del comprimido Fosfato de cloroquina estándar, Almidón de maíz, Devats, Estearato de magnesio.
Instrumentos
Para la medición de la absorbancia se utilizó un espectrofotómetro UV-Vis de doble haz
Preparación de la solución
Solución estándar
Se preparó una solución madre de 3.40 mg mL-1 de fosfato de cloroquina en agua tomando 0.34 g de fosfato de cloroquina estándar en un matraz aforado de 100 mL.
A partir de la solución estándar intermedia se prepararon soluciones estándar de trabajo de diferentes concentraciones (10,88, 12,24, 13,60, 14,96, 16,32, 21,24 y 30,56 μg mL-1) mediante dilución en serie con agua destilada.
Solución de muestra de comprimidos
Se compraron en farmacias locales muestras de tabletas de fosfato de cloroquina de diferentes marcas. Etiquetadas como 250 mg/tableta.
Se pesaron con precisión 20 comprimidos de cada marca y se pulverizaron con un mortero limpio.
Para cada marca, una cantidad del polvo que contenía 0,34 g de fosfato de cloroquina según la etiqueta se transfirió a un matraz aforado de 100 mL, se disolvió en unos 60 mL de agua destilada y luego se diluyó hasta la marca con agua destilada.
donde
Se obtuvo por filtración una solución clara de fosfato de cloroquina en tableta en agua destilada.
Se preparó una solución de trabajo del comprimido de 13,60 μg mL-1 disolviendo 10 mL del filtrado en 100 mL de agua destilada.
Se preparó una mezcla sintética mezclando cantidades apropiadas de la sustancia farmacéutica activa (fosfato de cloroquina) y las sustancias farmacéuticas inactivas (excipientes).
La solución de muestra de la mezcla sintética se preparó del mismo modo que la muestra de comprimidos
Métodos analíticos
Para determinar la longitud de onda de absorbancia máxima (λmax) del fosfato de cloroquina
Se exploraron 13,60 μg mL-1 de la solución estándar en el intervalo de longitud de onda de 400 a 230 nm contra agua destilada como blanco.
Se encontró que la longitud de onda correspondiente a
la absorbancia máxima (λmax) era de 343 nm
, que se utilizó como longitud de onda de trabajo (λmax) para la determinación del fosfato de cloroquina en formulaciones farmacéuticas.
El contenido de fosfato de cloroquina en muestras de comprimidos de dos marcas y en muestras de comprimidos sintéticos
se determinó espectrofotométricamente utilizando agua como disolvente
Con fines comparativos
las muestras de comprimidos comercializados y la muestra preparada en laboratorio se analizaron siguiendo el procedimiento de referencia estándar (USP, 2007)
Concomitantemente, se determinó la absorbancia de ambas soluciones en cubeta de 1 cm a la longitud de onda de máxima absorbancia (343 nm) utilizando ácido clorhídrico diluido (1 en 1000) como blanco. Se calculó y registró la cantidad de fosfato de cloroquina en las formulaciones de dosificación.
Validación del método propuesto
Después de seleccionar el disolvente adecuado y la longitud de onda de absorbancia máxima, el método desarrollado se validó para los parámetros;
Especificidad
Linealidad
Precisión
Exactitud
Límite de detección y cuantificación,
Robustez / resistencia
Estabilidad de la solución de analito
Según las directrices de la Conferencia Internacional de Armonización (ICH)24 y USP12.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Selección del disolvente adecuando
La solubilidad de un fármaco es una de sus propiedades fisicoquímicas más importantes
El sistema disolvente debe proporcionar una solución homogénea en la que toda la sustancia soluto investigada se disuelva completamente.
Se prepararon las mismas concentraciones de fosfato de cloroquina utilizando tres disolventes diferentes (agua destilada, HCl 0,1 M y H2SO4 0,05 M), en las tablas se resumen las absorbancias espectofotométricas.
La absorbancia media del analito en agua destilada es razonablemente grande con una precisión mejorada que en los otros disolventes.
Lo que hace que el agua destilada sea el mejor disolvente candidato para la determinación del fosfato de cloroquina utilizando el espectrofotómetro UV-Vis. A comparación de los disolventes orgánicos el agua no es tóxica.
Validación del método
Estudio de interferencias
Se investigó el efecto de excipientes como el talco, el almidón y el estearato de magnesio en la determinación del fosfato de cloroquina.
Se prepararon dos soluciones; una que contenía sólo fosfato de cloroquina y otra que contenía una mezcla de fosfato de cloroquina y los excipientes (placebo), ambas con una concentración similar de fosfato de cloroquina.
La absorbancia UV-Vis de las dos muestras se registró mediante barrido entre 230 y 365 nm. Los espectros se compararon tanto en términos de λmax como de intensidad de absorbancia.
La presencia de los excipientes no mostró ninguna λmax adicional ni afectó significativamente a la intensidad de absorbancia del analito en su λmax característica (343 nm)
La presencia de los posibles interferentes (excipientes) causó un error inferior al 2%, lo que sigue siendo tolerable
El método UV-Vis propuesto para la determinación de fosfato de cloroquina utilizando agua como disolvente mostró su potencial aplicabilidad para la determinación de fosfato de cloroquina en formulaciones de comprimidos sin interferencias significativas de la matriz del fármaco.
Linealidad
Se prepararon cinco concentraciones estándar de fosfato de cloroquina en agua destilada (10,88, 12,24, 13,60, 14,96, 16,32, 21,24 y 30,56 μg mL-1) en el rango 80-120% del analito en el comprimido.
Para cada solución estándar, se registraron absorbancias por triplicado a 343 nm frente a agua destilada como blanco.
La absorbancia media mostró una dependencia lineal de la concentración de fosfato de cloroquina en el rango 10,88-30,56 μg mL-1 con una ecuación de regresión lineal y coeficiente de determinación (R2) de A = 0,3828C (μg mL-1) - 0,0391 y 0,99972, respectivamente.
Precisión
En todos los casos, se realizaron seis mediciones replicadas para una solución estándar de fosfato de cloroquina de 13,6 μg mL-1 y se calcularon las desviaciones estándar estándar y estándar relativa porcentual (%RSD) para cada una.
El coeficiente de variación calculado en los tres casos (repetibilidad, resultados intradiarios e interdiarios) resultó estar dentro del rango límite aceptable.
Los coeficientes de variación satisfactoriamente bajos sugirieron un alto nivel de precisión y, por tanto, la idoneidad del método desarrollado para la determinación de fosfato de cloroquina en formulaciones farmacéuticas utilizando agua como disolvente.
Exactitud
En las tabletas farmacéuticas se evaluó realizando estudios de recuperación de cloroquina estándar a partir de tres formulaciones sintéticas de tabletas de fosfato de cloroquina.
Se prepararon concentraciones de 6,8, 13,6 y 20,4 μg mL-1 de cloroquina estándar (50, 100 y 150% de la etiqueta del comprimido de fosfato de cloroquina) y se mezclaron con los excipientes
Tras registrar mediciones de absorbancia por triplicado para cada muestra, se calculó la concentración correspondiente mediante la ecuación de regresión formulada.
Las excelentes recuperaciones en el rango 98,79 ± 0,11 - 101,20 ± 0,19% indicaron la exactitud del método desarrollado y, por lo tanto, su aplicabilidad para la determinación de fosfato de cloroquina en formulaciones de comprimidos.
Límite de detección (LOD) y Límite de cuantificación (LOQ)
Se calcularon utilizando la desviación estándar de la medición de absorbancia replicada (n = 7) de una muestra en blanco a una longitud de onda de 343 nm y la pendiente de la curva de calibración para siete puntos de datos como 0,073, y 0,220 μg mL-1, respectivamente.
Robustez y resistencia
Se evaluó comparando los resultados para la misma solución por dos analistas.
La robustez/resistencia del método desarrollado se evaluó comparando los resultados para la misma solución por dos analistas.
Estabilidad de la solución de analito
Se evaluó el efecto del tiempo de análisis tanto en el aspecto físico como en la absorbancia de la muestra de tabletas de fosfato de cloroquina en agua.
Los análisis se realizaron cada intervalo de 4 horas y los resultados de absorbancia (datos no mostrados) no mostraron dependencia del tiempo, lo que indica la estabilidad del fosfato de cloroquina en agua.
La solución de analito resultó ser estable hasta 24 horas en condiciones normales de trabajo en el laboratorio, con un coeficiente de variaciones aceptable (0,7044% y 0,7256% para las soluciones estándar y de muestra, respectivamente).
Preparados de cloroquina fosfato en farmacéuticos
El análisis de ensayo de la tableta comercializada y las muestras de mezcla sintética preparadas en laboratorio se analizaron cuantitativamente utilizando el nuevo método propuesto.
Los valores del ensayo de fosfato de cloroquina para cada muestra se calcularon tomando la absorbancia media respectiva medida utilizando el método desarrollado y el método oficial de la USP
Los resultados obtenidos para este análisis se compararon estadísticamente con el resultado obtenido utilizando el método oficial USP mediante el cálculo de los valores estadísticos t y F.
Los valores estadísticos experimentales fueron inferiores a los respectivos valores teóricos tabulados, lo que confirma que los resultados obtenidos con el método desarrollado son similares a los obtenidos con el método oficial.
Comparación entre los métodos espectrofotométricos propuesto y de referencia
La comparación entre el método desarrollado y el método de referencia se realizó en términos del tiempo necesario para el análisis y el coste del mismo.
La comparación entre el método desarrollado y el método de referencia se realizó en términos del tiempo necesario para el análisis y el coste del mismo.
El tiempo total requerido para el análisis de una muestra siguiendo el método propuesto resultó ser mucho más corto y barato que el método de referencia
El método espectrofotométrico UV-Vis desarrollado utiliza como disolvente 572 mL de agua destilada tanto para la muestra como para las preparaciones estándar, mientras que el método de extracción utiliza 125 mL de cloroformo, 100 mL de agua destilada y 720 mL de HCl diluido, lo que hace que difieran enormemente en su coste de análisis.
CONCLUSIONES
Se desarrolló un método espectrofotométrico UV-Vis simple usando agua barata y respetuosa con el medio ambiente como disolvente para la determinación del fosfato de cloroquina en su forma farmacéutica en tabletas
Su absorbancia se midió a una absorbancia máxima de 343 nm frente al blanco de reactivo correspondiente
El método desarrollado es simple, preciso, reproducible, exacto, específico, económico y consume menos tiempo.
El método también ha sido evaluado estadísticamente y los resultados obtenidos son exactos, precisos y libres de interferencias de otros aditivos o excipientes presentes en la formulación.
No hubo interferencia de los excipientes utilizados en las formulaciones de comprimidos y, por lo tanto, el método es adecuado para el análisis de comprimidos formulados.
Yamilé Alcántara Nicasio