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Exploration de la moelle : Myélogramme Biopsie Ostéo Médullaire P2 -…
Exploration de la moelle : Myélogramme Biopsie Ostéo Médullaire P2
Analyse des frottis médullaires
Coloration :
May Grundwald-Giemsa -> Analyse cytologique.
Perls -> colora° du fer -> intérêt pour mise en évidence des sidéroblastes en couronne.
Autres : Bleu de toluidine (basophiles/mastocytes) et Immunocytochimie).
Colorations
Le May-Grünwald : un colorant acide (Rosine) + colorant basique (bleu de méthylène).
Le Giemsa : l'éolien + colorant basique (azur de méthylène).
Lors de l'addi° d'eau, les sels se fixent sélectivement sur les constituants cellrs. Les constituants cellrs acides fixeront sélectivement les colorants basiques ou éléments basophiles (ADN, cytoplasme des L riche en ARN). Les constituants cellrs basiques, fixeront spécifiquement les colorants acides ou éléments acidophiles ou d'éosinophiles (hémoglobine et les granula° des PNE). Les constituants fixant les 2 types de colorants sont dits neutrophiles.
Résultat : Les noyaux sont bleu-violet. Les granula° des granulocytes basophiles sont bleu-noir. Les hématies sont beige-rosé, les granula° des granulocytes éosinophiles sont orangé. Les granula° des granulocytes neutrophiles sont violet-lilas. Les granula° des grands L sont pourpres.
Autres colorations :
Colora° de Perls : Colora° en vert du fer et recherche de sidéroblastes en couronne.
Colora° en bleu de Toluidine : Colora° en rouge des granulat° et recherche de mastocytes anormaux.
Colora° d'immunocytochimie : Ex -> myéloperocydase activé, estérase. Aide classifica° des LAM++.
Étude cytomorphologique
Étude de la richesse
Apprécia° de la richesse globale en cells : estimée de manière empirique, évaluée en f° de l'âge, moelle pauvre vs moelle riche et moelle hémodiluée. => Grossissement x100.
Appréciation de la richesse en mégacaryocytes (sur l'ensemble de la lame) : estimée de manière empirique, semi quantitatif : absence, rare, nombreux... => Grossissement x100.
Analyse quantitative et détec° des cells anormales sur au moins 500 cells : Regroupement par lignée (granuleuse/ érythroblastique/ lymphoïde), rapport érythroblastes/ granuleux = 1/3 ou 1/4 chez le sujet normal, Présence de cells anormales (excès de blastes, de plasmocytes...). => Grossissement x500-1000.
Analyse qualitative : Recherche d'anomalies de matura° : dysplasie ? Présence de cells anormales ?
Non inclues dans le décompte : Cells du microenvironnement (ostéoblastes et -clastes, mastocytes, macrophages...) ? Cells métastatiques ? => Grossissement x500-1000.
Analyse du frottis
Lignée granuleuse
Lignée érythroblastique/ mégacaryocytaire
Cellules mono-macrophagiques
Lymphocytes
Cellules indifférenciées : Cells très immatures, impossible de les relier à une lignée aussi appelés hémoblastes.
Cells de la trame osseuse
Ostéoblastes : Cells ovulaires à fusiformes, 20-40μm de long, noyau excentré. Souvent regroupées en petit amas, surtout chez l'enfant. Cytoplasme gris-bleu aux contours mal délimités, région claire centrale. F° = synthèse osseuse.
Ostéoblastes : Cells géantes 100μm. 6 à 8 noyaux tous identiques et indépendants (à la différence du MegaK). Cytoplasme basophile ou rosé, granula° rouge-violacé. Lignée monoculaire (histiocyte macrophage spécialisé). F° = résorption osseuse.
Richesse : Attention corrélé à l'âge.
Analyse quantitative et qualitative :
Réparti° des sous-popula° hématopoïétiques : Réparti° normale ? Envahissement par un sous-type cellr ? Présence de cells extra-hématopoïétiques (métastases ?)
Anomalie cytologique : Dysplasie ? Cells anormales ? Lymphome ? Leucémie aigue ?
Interpréta° du myélogramme
1. Apprécia° de la richesse de la moelle -> x10
: En f° de l'âge. Chez nourrisson pas de graisse. Réparti° proche de l'adulte obtenue à partir de 5 ans. Chez le patient (très) âgé, frottis de cellularité diminuée car augmenta° des adipocytes.
2. Apprécia° de la qualité du prélèvement
: Est-ce que vraiment de la moelle ? Présence de cells "exclusivement" présente dans les tissus : grains médullaires, cells de la trame osseuse, mégacaryocytes, mastocytes, macrophages, plasmocytes. Décompte cellulaire : présence de précurseurs.
3. Décompte cellulaire
Mégacaryocytes
Quantifica° : Chiffre de mégacaryocytes à comparer impérativement à la numéra° plaquettaires sanguines. 5 catégories de quantifica° (GFHC) : non observés, très rares, diminués, quantité normale, nombreux, augmentés.
Morphologie : Stades de matura°. Dysmégacaryocytopoïèse >10% ?
Observa° minimale de 30 mégacaryocytes.
Autres cells (petit grossissement)
Cells rares ou non hématopoïétiques mais attendues : Cells rares présentent normalement -> mastocytes (contexte ? Waldenstrom, mastocytose ?) + macrophages (suspicion de S.A.M. ? leishmaniose ?). Cells de la trame osseuses (ostéoblastes ou ostéoclastes).
Cells rares anormalement présentes (plus ou moins grande taille) : cells de surcharge ou extra-hématopoïétiques (métastases en amas ou isolées)...
Examen cytoplasme-morphologique (fort grossissement) : Approche qualitative des lames. Déterminer s'il existe : des anomalies qualitatives (dysmyélopoïèse ?) après analyse de chacune des lignées à tous les stades et des cells anormales ou cells immatures en excès.
Décompte
Sur 100 à 200 cells en f° de l'aspect du frottis (pauvre, dilué) et de l'indica° (connue à ce stade) par personnes pour une décompte total sur >500 cells.
Décompte sur 3 lames mais en privilégiant les lames les plus cellrs (éliminer les diluées) : Zone de décompte repérée au faible grossisement et Zone bien étalée, bien colorée, bien cellr en évitant les zones de lyse cellr (ex : difficulté de ponc°).
Interpréta°.
Valeurs attendues
Hyperplasie érythroblastique lorsque dans une moelle riche la part d'érythroblaste est >45%.
Hypoplasie érythroblastique lorsque dans une moelle pauvre la part d'érythroblaste est <15% ou d'une érythroblastopénie.
Un myélogramme s'interprète toujours avec
Une NFS (minimum de moins 7 jours). Si anémie : peu expliquer une hyperplasie érythroblastique. Si thrombopénie : recherche cause périphérique ou centrale...
Le contexte clinique. Suspicion diagnostic. Suivi, temps de suivi (ex : J15 post indus° dans les LA). Signes cliniques : adénopathies, splénomégalique... Antécédents importants (ex : VIH, Kc ancien traité par chimiothérapie).
ATTENTION le biologiste lit le myélogramme qui fait son interpréta°, pour permettre une interpréta° optimale vous avez le devoir de transmettre toutes les informa° qui sont utiles.
La conclusion est faite par un biologiste au laboratoire.
Compte-rendu
La conclusion (+++) doit mentionner : les anomalies morphologiques significatives, la (les) hypothèse(s) diagnostique(s) et les examens complémentaires à effectuer.
Ajout d'avertissements (+++) en cas de frottis interprétable : dilution sanguine, mauvais étalement, état pathologique de la moelle (fibrose).
Mentionner les échanges (anapath, RCP locale ou régionale, avis d'experts).
Distinction entre moelle pauvre et moelle hémodiluée (tableau)
Anomalies qualitatives : Présence de cells anormales ? Comme baltes avec corps d'Auer en fagot ou envahissement de plasmocytes.