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PRINCIPI DI BIOTECNOLOGIE - Coggle Diagram
PRINCIPI DI BIOTECNOLOGIE
ESPERIMENTO DI GRIFFITH
STEPTOCOCCUS ANEUMONALE
S
Ceppo virulento provvisto di capsula
R
ceppo non virulento sprovvisto di capsula
posto in presenza di pneumococchi S uccisi del calore, diventa virulento
IL CEPPO S CONIENE UN FATTORE TRASFORMANTE
ESPERIMENTO DI AVERY
Il ceppo S viene trattato
S+proteasi+R
VIRULENTO
S+DNAasi+R
NON VIRULENTO
S+RNAasi+R
VIRULENTO
IL FATTORE TRASFORMANTE È IL DNA
ESPERIMENTO DI HERSEY E CHASE
fagovirus T2
isotopo 35S (proteine)
la radioattività fu constatata all'esterno delle cellule batteriche
isotopo 32P (DNA)
la radioattività si trova all'interno delle cellule batteriche
IL DNA È LA COMPONENTE VIRALE INIETTATA NEI BATTERI
ELETTROFORENSI
separa molecole elettricamente cariche grazie all'applicazione di un campo elettrico
amminoacidi, proteine, nucleotidi e acidi nucleici
necessita di
DNA o RNA
campo elettrico (catodo vicino ai pozzetti, anodo dall'altra parte)
stampo rettangolare (gel e cavità dette pozzetti)
gli anioni (negativi) migrano verso l'anodo (positivo)
ENIMI DI RESTRIZIONE
endonucleasi che riconoscono e tagliano le sequenze palindrome (regioni in cui il filamento superiore ed inferiore, se letti in direzione 5'- 3' , sono uguali
taglio sullo stesso livello
taglio sfalsato
BLOT (trasferimento su membrana)
NORTHERN BLOT (RNA)
WESTERN/ IMMUNO BLOT (PROTEINE)
SOUTHER BLOT (DNA)
PREVEDE
DENATURAZIONE (elettroforesi)
TRASFERIMENTO DEL DNA DENATURATO SU UNA MEMBRANA DI NITROCELLULOSA
AGGIUNTA DI UNA SONDA RADIOATTIVA
PCR
AMPLIFICARE SEGMENTI DI DNA CHE PRESENTANO BREVI SEQUENZE DI BASI, DETTE MINISATELLITI O MICROSATELLITI
il DNA viene posto insieme a
DNA polimerasi Taq
desossinucleotidi trifosfati
2 primer
3 step
RAFFREDDAMENTO (fino a circa 60C) i primer si appaiano
ALLUNGAMENTO (circa 72C) la DNA polimerasi Taq sintetizza un nuovo filamento a partire dai primer
DENATURAZIONE (95 C- 98C)
DNA pari a 2ⁿ, n=cicli
SEQUENZIAMENTO DI SANGER
STABILIRE LA SEQUENZA DELLE BASI DEGLI ACIDI NUCLEICI
4 provette
primer marcati
deossinucleotidi trifosfato (dNTP)
filamento stampo
dideossinucleotidi (ddNTP)
DNA polimerasi
DNA RICOMBINANTE
DNA OTTENUTO DA 2 FRAMMENTI DI DNA DI ORIGINE DIVERSA
(INSULINA UMANA)
MODI
vettore di clonaggio
PLASMIDI e FAGI dotati di una sequenza ri riconoscimento e un'origine di duplicazione (sequenza Ori)
ricevente
donatore
TECNICA
separazione (elettroforesi)
identificazione (Southern blot)
taglio (enzimi di restrizione)
moltiplicazione (PCR)
studio della sequenza (sequenziamento)
incorporazione (DNA ligasi)
TRANSFEZIONE se il ricevente è una cellula eucariote o un virus, TRASFORMAZIONE se il ricevente è un batterio
PLASMIDI
PICCOLI ANELLI DI DNA, ELEMENTO GENETICO MOBILE PROCARIOTICO A REPLICAZIONE AUTONOMA
presenti nel citoplasma dei batteri
sono importanti dal punto di vista
MEDICO (fattori R, antibiotico-resistenza)
BIOTECNOLOGICO (vettore ricombinante)
BIOLOGICO (fattori F, coniugazione batterica)
FAGI
VIRUS CHE INFETTANO LE CELLULE BATTERICHE PER POTERSI REPLICARE
VETTORI
DOPPIO FILAMENTO MARCATO
CLONAGGIO
COPIE DI UNA SEQUENZA DI DNA D'INTERESSE MEDIANTE LA TECNICA DEL DNA RICOMBINANTE
CLONI
POPOLAZIONI CELLULARI O VIRALI CONTENETI LA MOLECOLA DI DNA RICOMBINATE DI PARTENZA
CLONAZIONE
COPIA GENETICAMENTE IDENTICA DI UN ESSERE VIVENTE
PREVEDE
PRELEVAMENTO DEL NUCLEO DI UNA CELLULA SOMATICA
TRASFERIMENTO DEL NUCLEO ESTRATTO IN UNA NUOVA CELLULA UOVO
IMPIANTO DELLA NUOVA CELLULA UOVO