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T.6. Electroforesis - Coggle Diagram
T.6. Electroforesis
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4. Western Blot
Una vez realizad el SDS-PAGE, tenemos en el gel marcas de las prot, queremos saber cual es de nuestro interés
- Gel entre dos esponjas una hacia campo + y otra a -
- Entre esponja + y gel, hay una membr. de nitrocelulosa, por la que pasaran las prot - hacia polo +
- En la membr. se añade anticuerpos. “Hibridación anti-proteína”
- Al 1º Anticuerpo, se le añade uno secundario que lleva único una enzima que al unirse al sustrato desprende de partículas coloreadas
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6. Electroforesis en 2D
se separan en 2 dimensiones, según su pi y según su tamaño, se usa para identificar enziamas con peq modificaciones, después se puede hacer wester blot para ver si mi prot presenta diferentes pi en distintas partes del org
1º Dimensión: IEF con urea y detergente no ionico, para desnaturalizar pero sin adquirir carga -, se clasifican por pi
2º Dimensión: incubación en SDS y electroforesis SDS-PAGE, adquieren carga - y se separan por tamaño
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