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T.4. Absorción de luz - Coggle Diagram
T.4. Absorción de luz
1.Absorción de luz y transición electrónica
Existe:
Estado basal
: orbital molecular antienlazante que tiene menor Energía
Estado excitado
: orbital molecular antienlazante que tiene mayor Energía. Es inestable
La energía de los átomos se encuentra
cuantificada
. La emisión de radiación no es continua sino que sale en paq llamados
fotones
Para que un e- pase estado basal a excitado necesita absorber un fotón. Tanto basal como excitado
no tienen E concreta
Para reprender los orbitales se usa 4 líneas, el conjunto se llama
singlete
Para calcular la E de un fotón se calcula la
Ecuación de Plank
E=hc/λ=hv (c: v luz, h: constante Plank)
2. Absorción de luz. Orbital π
Los e- solo pueden captar E a determinada λ. Solos los fotones del orbital pi puedes absorber luz. A mayor nº de enlaces = mayor λ
3. Espectro radiación electromacnetica
Region visible
: 400-700 nm.
Región UV
: 15-380nm
4. Espectro fotómetro
Aparato que permite ver la absorción de luz de una disolución. (Abs/nm)
5. Ley de Lambert-Beer
A=E x l x c
6. Espectro de Absorción NAD+ / NADH
Ambos con Max de absorción en
260nm
pero NADH a parte otro a
340nm
7. Espectro de absorcion clorofila
clorofila=pigmento que participa en la fotosíntesis, la parte que absorbe luz es el
anillo tetrapirronico
Clorofila A:
5 Max de absorción a 675 y 425 nm
Clorofila B:
3 Max a 450 y 650 nm
Dos zonas básicas, entre 300 y 500nm (tonos azules y violetas) y entre 600-700nm (tonos amarillos y rojos)
Absorbe el rango morado, azul y rojo y refleja verde
Estados de excitación de la clorofila
Los e- pueden experimentar 3 cambios:
Transición electrónica: paso de e- de un estado a otro
Cambios vibracionales y rotacionales
Cambio en el spin
Dependiendo del fotón absorbido los e- saltan de un nivel u otro:
Fotón azul:
menor λ, mayor frecuencia de onda, mayor energía, salta al 2º nivel/singlete
Fotón rojo:
mayor λ, menor frecuencia de onda, menor energía, salta al 1º nivel/singlete
Pasar de un singlete a otro, llegara un punto que la E desprenderá E diferente desde esatado excitado al basal. De 4 formas:
Trabajo químico
(fotosíntesis)
Transferencia de E
a otras moléculas
Fluorescencia
: se emite luz de una λ mayor que la E que se ha absorbido. Presenta un E menor que la de absorcion porque ha perdido E. Se diferencian en el tiempo en el que pasan los e-, FL: instantánea y FS: tarda mas
Fosforescencia
: los e- parten del 1º singlete y pierden E pasan a un estado intermedio (
triplete
). Existe E se puede transmitir dal O2 dando lugar a especies radiactivas del O.
8. Cuantificación de molec. por espetrofotometría
8.1 Cálculo de coeficiente de extinción molar
Se hacen disoluciones de distinta molarida
Se anotan los resultados en una gráfica y se hacen una recta (curva patrón)
Se toman dos Pts aleatorios. y1-y2=b(x1-x2)
Otra manera es con la pendiente de la recta, se restan 2 valores de ABS, dividiendo entre la recta de las concentraciones respectivas
8.2. Reacción de colorimetria
Existen 2 tipos de molec:
Las que
absorbancia directa
: absorben luz naturalmente (coenzimas, pigmentos, porcinas, prot con tirosina y triptofano y los ácidos nucleicos)
Las de
absorbancia indirecta
: necesitan combinarse (Métodos colorimétricos) (ADN (difenilamina), azucares, prot sin lo anterior (azul de comassie) y lípidos (colesterol con enzimas))
Reaccion de colorimetria:
1 molec incolora reacciona con in tinte para crear un complejo coloreado
8.3. Determinación act. Enzimática
Podemos determinarla gracias a la absorbancia. Conociendo cuanto a tardado en dar la reacción, podéis determinar act enzimática en mol/s.
Si desconocemos los productos de la reacción podemos realizar reacciones colorimetricas o reacciones acopladas a productos