Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
Cladobotyum (Dactylium) dendroides NRRL 2903 - Coggle Diagram
Cladobotyum (Dactylium) dendroides NRRL 2903
Polyporus
basidiomycetes pembusukan kayu yang penting
tumbuh di Polyporus dengan cara mikoparasit dan secara tidak sengaja diisolasi alih-alih inangnya
Sekresi galaktosa oksidase
Gibberella fujikuroi (Fusarium moniliforme)
Gibberella zeae (Fusarium graminearurn)
Beltmniella porforicensis
Cladobofryum dendroides (NRRL 2903)
Sifat molekuler dan biokimia galaktosa oksidase:
Model struktural telah ditetapkan pada resolusi 17 nm oleh kristalografi sinar-X
gen a-gao yang mengkode galaktosa oksidase telah dikloning dan diurutkan
Struktur galaktosa oksidase menunjukkan adanya kofaktor endogen, yang terdiri dari ikatan tioeter baru antara Tyr 272 dan Cys 228, dan interaksi penumpukan dengan Trp 290
Analisis morfologi dan genetik sporulasi menunjukkan bahwa jamur ini adalah spesies Fusarium
Metode
Strain dan media
NRRL 2903 media minimal (kultur starter) mengandung 1% glukosa, 74% (v/v) garam dan sumber nitrogen
Media pertumbuhan yang mengandung selulosa 2%, atau jika diperlukan, dengan campuran selulosa dan glukosa atau ekstrak ragi 0,5-75%
Semua kultur ditanam dalam inkubator orbital, pada 25' selama 3-5 hari pada 50-100 rpm.
Agar dekstrosa kentang (Oxoid) or 50% ekstrak kentang, 2% sukrosa, 2% agar) digunakan untuk pemeliharaan kultur.
Pemurnian DNA genom
Miselium dikumpulkan dengan penyaringan melalui muslin, dibekukan pada suhu - 70 C, dikeringkan secara beku, dan digiling dalam nitrogen cair dengan lesung dan alu.
Analisis noda Southern genom
DNA genom (10 ~ g) dicerna dengan EcoR I atau Hind I11 (IU pg-' DNA) dalam buffer
difraksinasi ukuran pada gel agarosa 1%
Setelah elektroforesis, DNA ditransfer ke membran Hybond-N + (Amersham Corp.), dan dihibridisasi ke fragmen 1,4 kbp berlabel 32P dari gen gaoA
Hibridisasi berada pada 65C dalam 5 x SSC, 5 x Denhardt, 0-5% SDS dan 0,1 mg ml-' DNA timus anak sapi yang disonikasi.
Filter dicuci secara berurutan dalam 2 x SSC, 1 x SSC dan 0,1 x SSC selama 20 menit pada 65 C
Amplifikasi RAPD DNA (RAPD-PCR) polimorfik
Amplifikasi RAPD dilakukan dalam volume reaksi 50 uL
mengandung 0-25 ug templat DNA genomik, primer 200 pmol, 0,25 mM-dNTPs dan 0,5 U SuperTaq dalam buffer reaksi 1 x SuperTaq (HT Biotechnology), dilapisi dengan 30 uL minyak mineral
Rezim suhu untuk amplifikasi adalah: 95C dalam 5 menit, 40 siklus [95C -1 menit, 35C-1 menit, 72 C-2 menit] dan 55C-2 menit terakhir
PCR Genomik