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Électrophorèse des Protéines, (B. Isotachophorèse, 2. Frontières Mobiles,…
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B. Isotachophorèse
Définition : Technique de séparation d'ions de même type de charge, souvent utilisée pour les anions.
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Types d'Ions :
Ions leaders (L) : Plus mobiles, se déplacent plus rapidement.
Ions de traine (T) : Plus lents, se déplacent moins rapidement.
Exemple : Dans un mélange de protéines, les ions leaders migrent plus rapidement vers l'anode, tandis que les ions de traine sont retenus derrière.
2. Frontières Mobiles
- Migration des anions : Lorsqu'un courant passe, les anions se déplacent vers l'anode.
- Création de zones : Les protéines se regroupent selon leur taille et charge.
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- Règlement du Champ Électrique
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- Veine liquide : Utilisation de solutions pour la séparation.
- Tube rotatif : Rotation pour améliorer la séparation.
- Tube capillaire : Séparation dans des tubes très fins.
- Membranes et gels : Utilisation de gels pour la séparation.
- Une concentration appropriée est essentielle pour une séparation efficace.
- Trop de protéines : bandes brouillées.
- Trop peu de protéines : résultats peu fiables.
- A. Tisélius : Découverte en 1937.
- Prix Nobel de chimie : 1948, pour ses contributions à la séparation des protéines.
- Principe de Fonctionnement
- Les protéines migrent vers l'anode en fonction de leur charge.
- Utilisation d'un gel ou d'un liquide pour la séparation.
- Migration des anions vers l'anode.
- Création de zones distinctes selon la taille et la charge des protéines.
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- ([A]), ([B]), ([C]) : concentrations des ions.
- (u_A), (u_B), (u_C) : mobilités respectives des ions.
- pH constant : Influence la charge des protéines.
- Champ électrique constant : Maintient une force constante sur les ions.
- Charge des protéines : Dépendante du pH et de la structure de l'échantillon.
- Exemple : Les ions B plus mobiles peuvent rattraper les ions A, entraînant la suppression de la limite entre eux.
- Taille des pores : Influence la séparation des protéines selon leur taille.
- Distribution des pores : Uniformité pour une séparation efficace.
- Utilisation de membranes semi-perméables pour concentrer les protéines.
- Élimination des petites molécules et solutés.
- Élimination des petites molécules autour des protéines.
- Permet de concentrer les échantillons.
- Concentration élevée : bandes larges et floues.
- Concentration faible : difficulté à détecter les protéines.
- Technique de séparation des protéines par leur mobilité dans un champ électrique.
- Technique de séparation d'ions de même type de charge, souvent utilisée pour les anions.
- Utilisation de deux tampons différents pour créer un gradient de mobilité.
- Ions leaders (L) : Plus mobiles, se déplacent plus rapidement.
- Ions traînants (T) : Plus lents, se déplacent avec les ions leaders.
- Règlement du Champ Électrique
- Ajustement du champ électrique pour maintenir la séparation.
- Technique de séparation des protéines selon leur point isoélectrique.
- Utilisation d'un gradient de pH pour permettre la séparation.
- Les protéines migrent jusqu'à atteindre leur point isoélectrique, où elles ne portent plus de charge.
- Agarose : Utilisé pour les grandes molécules.
- Polyacrylamide : Utilisé pour les petites protéines.
- Précipitation des protéines en fonction de leur solubilité.
- Utilisation d'acides (ex. : acide trichloroacétique) pour précipiter les protéines.
- Mesure de l'absorbance à 280 nm pour déterminer la concentration des protéines.
- Utilisation de réactifs spécifiques (ex. : réactif de Bradford) pour évaluer la concentration des protéines.
- Préparation d'Échantillons
- Ajustement de la concentration avant l’électrophorèse pour garantir des résultats optimaux.
- Typiquement entre 1 et 5 mg/mL pour les échantillons de protéines.
- Exemple : Les ions B plus mobiles peuvent rattraper les ions A, entraînant la suppression de la limite entre eux.
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- Définition : Technique pour séparer les protéines dénaturées en fonction de leur masse.
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Voici une version détaillée des branches et sous-branches pour la carte mentale sur l'électrophorèse des protéines, prête à être utilisée dans un PDF.
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Cette structure détaillée peut être utilisée pour créer un document PDF clair et informatif. Si tu souhaites que je génère ce PDF, fais-le moi savoir !
