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III. Dosages immunochimiques - Coggle Diagram
III. Dosages immunochimiques
1. Les anticorps
1.1 Définition
Les anticorps, ou immunoglobulines, sont des glycoprotéines produites par les lymphocytes B en réponse à un antigène. Ils jouent un rôle crucial dans le système immunitaire en reconnaissant et en neutralisant les agents pathogènes.
1.2 Structure
1.2.1 Hétérotétramère
Composé de
2 chaînes légères
(en général, de type kappa ou lambda) et
2 chaînes lourdes
(de type gamma, alpha, mu, epsilon ou delta).
1.2.2 Glycosylations
Les anticorps contiennent des résidus glucidiques qui influencent leur stabilité et leur interaction avec d'autres molécules.
1.3 Reconnaissance spécifique d’un antigène
1.3.1 Épitope
Une région spécifique d'un antigène reconnue par un anticorps. Un antigène peut avoir plusieurs épitopes.
1.3.2 Polyclonaux vs Monoclonaux
Polyclonaux
: Mélange d’anticorps provenant de différentes cellules B, chacun reconnaissant un épitope différent de l'antigène.
Monoclonaux
: Anticorps produits par une seule lignée cellulaire, reconnaissant un épitope spécifique.
Culture cellulaire hybridome
: Technique permettant de fusionner des cellules B productrices d'anticorps avec des cellules myélomateuses pour produire des anticorps monoclonaux.
1.4 Différentes classes d’anticorps (Isotypes)
1.4.1 IgG
Localisation
: Principalement dans le sang et les fluides corporels.
Proportion
: Représente environ 75% des immunoglobulines sériques.
Fonctions
:
Activation du complément par la voie classique.
Passage transplacentaire, fournissant une immunité passive au fœtus.
Neutralisation des toxines et des virus.
Agglutination des agents pathogènes.
1.4.2 IgA
Localisation
: Présente dans les muqueuses (système respiratoire, digestif) et les sécrétions (salive, larmes, lait maternel).
Proportion
: Environ 10 à 15% des Ig sériques.
Fonctions
:
Neutralisation des bactéries et des virus.
Transcytose à travers les cellules épithéliales, offrant une protection aux surfaces muqueuses.
1.4.3 IgM
Localisation
: Principalement dans le sang.
Proportion
: 5 à 10% des Ig sériques.
Fonctions
:
Première réponse immunitaire lors d'une infection.
Activation efficace du complément.
Formation de complexes immuns par agglutination.
1.4.4 IgE
Localisation
: Associée aux basophiles et mastocytes.
Proportion
: < 1% des Ig sériques.
Fonctions
:
Médiation des réactions allergiques.
Protection contre les parasites.
1.4.5 IgD
Localisation
: Principalement sur les lymphocytes B.
Proportion
: < 1% des Ig sériques.
Fonctions
: Rôle mal connu, mais impliqué dans l'activation des lymphocytes B.
2. Dosages et applications
2.1 Quantification
2.1.1 Marquage des anticorps
Peroxydase
: Utilisée dans les tests ELISA pour catalyser une réaction colorimétrique.
Phosphatase alcaline
: Utilisée pour des réactions enzymatiques avec des substrats spécifiques.
Fluorochrome
: Permet la détection par fluorescence, souvent utilisée en immunofluorescence.
Biotine
: Utilisée pour le couplage avec la streptavidine, augmentant la sensibilité des tests.
2.1.2 Deuxième anticorps
Généralement du même type de marquage que le premier anticorps, permettant l'amplification du signal.
2.2 Commercialisation
Recherche
: Utilisation de moteurs de recherche comme Google pour trouver des anticorps spécifiques.
Page Abcam
: Fournisseur reconnu d’anticorps et de réactifs pour la recherche.
2.3 Couplage biotine
Biotine + Protéine
: Création d'une protéine biotinylée, facilitant la détection par interaction avec l'avidine ou la streptavidine.
Protocole simple
: Utilisé pour amplifier la détection de l'anticorps.
2.4 ELISA
2.4.1 Définition
Enzyme-linked immunosorbent assay, méthode de dosage quantitative et qualitative.
2.4.2 Procédure
Utilisation de plaques multipuits, saturation des anticorps.
Détection par absorbance ou fluorescence, avec une gamme étalon pour quantification.
Exemple
: Dosage de protéines, hormones ou anticorps spécifiques dans des échantillons biologiques.
2.5 Autres applications
2.5.1 Agglutination
Technique basée sur l'agglutination des particules (cellules, bactéries) en présence d'anticorps spécifiques.
Utilisée pour le typage sanguin et le diagnostic de maladies infectieuses.
2.5.2 Immunocytochimie
Analyse immunocytochimique : Utilisation d'anticorps pour détecter des protéines spécifiques dans des cellules.
Exemple
: Analyse des cellules souches mésenchymateuses de rat avec un anticorps anti-SCA-1, visualisé par fluorescence.
IV. Les lectines
4.1 Définition
Les lectines sont des protéines de reconnaissance des glycannes, jouant un rôle crucial dans les interactions cellulaires et la signalisation.
4.2 Commercialisation
4.2.1 Glycomique fonctionnelle
Publication : Cell 143, 672-676 (modifié d'après Packer et al. 2008), qui aborde l'importance des lectines dans la glycomique.
4.3 Types de lectines
4.3.1 C-type Lectins
Lectines dépendantes du calcium, impliquées dans la reconnaissance des glycanes.
4.3.2 Galectins
Lectines qui se lient aux β-galactosides, impliquées dans la modulation de l'immunité et de la signalisation cellulaire.
4.3.3 Siglecs
Lectines qui reconnaissent des sialylated glycans, jouant un rôle dans la régulation de l'immunité.
4.3.4 GBPs (Glycan Binding Proteins)
Médiateurs du trafic intracellulaire, impliqués dans la reconnaissance des glycanes par des bactéries et des virus.
4.3.5 Adhésines et lectines bactériennes
Protéines permettant l'adhésion des bactéries aux cellules hôtes.
4.3.6 Toxines bactériennes
Certaines toxines bactériennes utilisent des lectines pour se lier aux cellules hôtes.
4.3.7 GBPs de virus capsidés
Protéines de liaison aux glycanes présentes sur la surface des virus.
4.3.8 GBPs de virus enveloppés
Protéines de liaison aux glycanes sur les virus enveloppés, influençant leur virulence.
4.3.9 GBPs microbiennes eucaryotes
Lectines provenant de microorganismes eucaryotes, jouant un rôle dans les interactions hôte-pathogène.
4.4 Protéomique ciblée
4.4.1 Utilisation des lectines dans la recherche de biomarqueurs
Abordant les limitations de sensibilité et de disponibilité dans le diagnostic et la recherche biomédicale.
4.5 Glycoarrays
Protéome ciblé : Utilisation de glycoarrays pour étudier les interactions entre les lectines et les glycans.
4.6 Spécificité de reconnaissance
Protéome ciblé : Glycosyltransférases, enzymes responsables de la modification des glycanes.
4.7 Protéomique des glycoprotéines
4.7.1 1ère stratégie
Identification des glycoprotéines par des méthodes chromatographiques.
4.7.2 2ème stratégie
Analyse par spectrométrie de masse pour identifier les modifications glycosylées.
4.7.3 Enzyme de déglycosylation
Utilisation d'enzymes pour enlever les résidus glucidiques afin d'étudier les protéines sous-jacentes.