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LABORATORIO PROFESSIONALE 10 - Coggle Diagram
LABORATORIO PROFESSIONALE 10
PASSATO
EPOCA RIA/IRMA:
NEL 1955-60 ROSALYN YALOW (PREMIO NOBEL PER LA MEDICINA E FISIOLOGIA NEL 1977) E SOLOMON BERSON
RIVOLUZIONANO I DOSAGGI INTRODUCENDO LA TECNICA RIA CHE UNISCE LA
SPECIFICITÀ DI UNA REAZIONE IMMUNOLOGICA
E LA
SENSIBILITÀ DI UN METODO RADIOCHIMICO.
NEL 1968 MILES E HALES PROPOSERO UNA SUA VARIANTE OVVERO L’ IRMA (DOSAGGIO IMMUNORADIOMETRICO).
EPOCA PRE-RIA:
FINO AL 1959 CIRCA, IL DOSAGGIO DI MOLECOLE BIOLOGICHE ERA EFFETTUATO CON:
L’ANALISI CHIMICA (ISOLAMENTO, PURIFICAZIONE E CONCENTRAZIONE)
ED IL DOSAGGIO BIOLOGICO.
TEST RADIO-IMMUNOLOGICO
“RADIO IMMUNO ASSAY” È UNA METODICA RADIOIMMUNOLOGICA UTILIZZATA PER LA DETERMINAZIONE QUANTITATIVA DI SOSTANZE COME ORMONI, ANTIGENI, MARKER TUMORALI, RECETTORI, ECC.,
CHE SFRUTTA LA REAZIONE ANTIGENE-ANTICORPO UTILIZZANDO COMPOSTI MARCATI CON ISOTOPI RADIOATTIVI.
METODI DI SEPARAZIONE DEL COMPLESSO AB+AG*:
LA VARIABILE INCOGNITA DELLA REAZIONE È L’ANTIGENE NON MARCATO (ANALITA) PRESENTE NEL SIERO DEL PAZIENTE.
X SEPARARE LA QUOTA DI MARCATO LEGATA NEL COMPLESSO (BOUND) DA QUELLA LIBERA (FREE)
SI UTILIZZANO METODI BASATI SULLA CATTURA DEL COMPLESSO SU FASE SOLIDA CON
AB ADSORBITO
O
CONIUGATO
A MATRICI SOLIDE:
TUBI DI REAZIONE (COATED TUBE);
BIGLIE
ǪUESTA MISURA CI DARÀ INDICAZIONI SULLA CONCENTRAZIONE DELL’ANALITA PRESENTE.
UTILIZZANDO UNA SERIE DI SOLUZIONI CON ANTIGENE NON MARCATO A CONCENTRAZIONE NOTA (STANDARD)
È POSSIBILE COSTRUIRE UNA CURVA DI CALIBRAZIONE DOSE-RISPOSTA.
X DETERMINARE L’ANALITA AG RISULTA INDISPENSABILE SEPARARE IL COMPLESSO AB+AG*(BOUND)
COSÌ DA POTERNE MISURARE LA QUOTA DI RADIOATTIVITÀ.
L’ANTICORPO NON DISTINGUE TRA ANTIGENE MARCATO E NON MARCATO
PERTANTO IN VIRTÙ DELLA LEGGE DI AZIONE DI MASSA,
L’ANTIGENE + CONCENTRATO OCCUPA + SITI ANTICORPALI.
COMPONENTI R.I.A.
• ANTIGENE (AG): GENERALMENTE LA SOSTANZA CHE DEVE ESSERE MISURATA (PRESENTE NEL CAMPIONE DI SIERO);
• ANTIGENE MARCATO (AG*): UGUALE ALL’ANTIGENE (MEDESIMA CAPACITÀ LEGANTE). CONTIENE UNO O PIÙ ATOMI DI UN ISOTOPO RADIOATTIVO.
• ANTICORPO (AB): IMMUNOGLOBULINA DI CLASSE IGG, CON ELEVATA SPECIFICITÀ, SENSIBILITÀ E BUONA COSTANTE DI AFFINITÀ X IL CORRISPONDENTE ANTIGENE;
GLI
ISOTOPI
SONO PRODOTTI, A PARTIRE DA UN PRECURSORE, GENERALMENTE IN UN CICLOTRONE,
IN UN REATTORE NUCLEARE O IN UN GENERATORE.
+UTILIZZATI NELLE TECNICHE RADIOIMMUNOLOGICHE SONO:
IDROGENO 3
(T1/2 12.66 ANNI – RAGGI BETA) UTILIZZATO PER MARCARE STEROIDI E FARMACI;
57CO
(T1/2 267 GG- RAGGI GAMMA) UTILIZZATO PER IL DOSAGGIO DELLA COBALAMINA.
IODIO 125
(T1/2 60 GG – RAGGI GAMMA) UTILIZZATO PER MARCARE GLI AA TIROSINA E ISTIDINA;
LA MARCATURA DELL’ANTIGENE SI PUÒ OTTENERE:
X SOSTITUZIONE
OVVERO SCAMBIANDO UN ISOTOPO STABILE DELL’ANTIGENE CON UNO RADIOATTIVO;
X AGGIUNTA
OVVERO INCREMENTANDO CON UN ISOTOPO RADIOATTIVO LA MOLECOLA DELL’ANTIGENE.
1 DEI METODI + UTILIZZATI È LA
IODAZIONE
:
DIRETTA
QUANDO IL RADIOIODIO (I125) È INCORPORATO DIRETTAMENTE NEI RESIDUI TIROSINICI DELLA CATENA PROTEICA;
X
CONIUGAZIONE
QUANDO NON SONO PRESENTI RESIDUI TIROSINICI E PERTANTO È NECESSARIO CONIUGARE UN RESIDUO TIROSINICO PREMARCATO AL RESIDUO AMINOTERMINALE DELL’ANTIGENE.
R.I.A.
I RIFIUTI RADIOATTIVI VENGONO SMALTITI ALL'INTERNO DI UN IMPIANTO AUTORIZZATO STABILITO DALLA LEGGE.
IMMUNOGENICO
E' UNA QUALSIASI SOSTANZA CHE SIA IN GRADO DI PROVOCARE UNA REAZIONE IMMUNITARIA, AGENDO COME ANTIGENE.
POSSIEDE UN'
ELEVATA SENSIBILITÀ
(ORDINE DEI PG/ML),
ELEVATA SPECIFICITÀ
,
ELEVATA PRECISIONE.
PRESENTA ALCUNI SVANTAGGI COME IL COSTO ELEVATO X APPARECCHIATURE E REAGENTI,
DURATA DEI REAGENTI (IL TRACCIANTE DECADE NEL TEMPO)
E PERICOLI RADIOLOGICI COLLEGATI ALL'USO DEI REAGENTI
TECNICA DI LABORATORIO UTILIZZATA PER DOSARE QUALSIASI COMPOSTO IMMUNOGENICO
DISPONIBILE IN FORMA PURA
E MARCABILE RADIOATTIVAMENTE
ANCHE I LAVORATORI VENGONO CONTROLLATI, PER ASSICURARE LA TUTELA DI QUESTI DA RISCHI DA RADIAZIONI IONIZZANTI.