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Biotecnologia - Coggle Diagram
Biotecnologia
Fertilização in vitro
placas de Petri
oócitos + espermatozoides
oócitoos imaturos ou maduros
quanto maior o folículo = mais maduro
técnica com pouca seletividade de folículo
vários folículos aspirados juntos
cresciemento folicular é lento = superovulação com cautela
material genético e citoplasma: mãe; DNA: pai
ICSI
um único folículo e um único espermatozoide
desenvolvimento embrionário
espermatozoide rompe a zona pelúcida
meio intracelular do oócito
fusão de pronúcleos
singamia dos materiais genéticos
mórula formada
formação do blastocisto (blastocele visível
produção de folhetos embrionários
blastocele = uma cavidade preenchida por liquido que separa as células da mórula, denominadas blastócitos
o embrião
coloração escura = falta de compactação da massa celular
cuidados
oócitos obtidos no inverno possuem menor qualidade
novilhas com menor competência
oxigenação
incubação inadequada pode levar ao estresse oxidativo (ideal: 3,5-8%)
aminoácidos podem ser utilizados com substrato energético
competencias
meiótica
na placa o oócito primário deve finalizar meiose I e o oócito secundário deve finalizar meiose II
apenas os oócitos que completaram a meiose podem ser fertilizados com sucesso e gerar embriões normais
avaliação dos oócitos
células da granulosa (cúmulus) são aspiradas junto - essenciais
1 grau: revestimento com multicamadas de cúmulus, claro e transparente
2 grau: revestimento de 3 a 5 camadas de cúmulus, ligeiramente mais escuro
3 grau: pouco revestido de células (1 a 3) , escuro
4 e 5 grau: não utilizado, pouco nutriente
aplicação
coleta dos ovócitos
maturação in vitro
maturação nuclear (precisa entrar em metáfase II)
maturação citoplasmática
maturação molecular (RNAm e ativação de genoma)
FIV
Criopreservação
importância: interrompe o metabolismo celular, viabilização do comércio internacional facilitando programas genéticos
diluentes
vitaminas + lipoproteínas + aminoácidos + antioxidantes + frutose + antibióticos + tampões
quimicamente definidos ou gema de ovo (maior risco sanitário)
cuidado: em caprinos deve-se centrifugar a amostra para evitar ação da fosfolipase A, que pode oxidar a gema do ovo
cálculo da palheta
concentração total x volume ejaculado = concentração final
dividir pela quantidade de palhetas desejadas = número de doses
multiplicar o número de doses x voluem da palheta (0,25 ou 0,5)
valor final - volume ejaculado
palheta com álcool polivinílico + algodão --> identificar a palheta com nome e número do reprodutor
retirar parte do conteúdo para evitar explosão da amostra no congelamento, criar pequenas bolhas e selar com o álcool
resfriar a amostra (desidratação celular gradativa - evita a lise) que estava em 35-37 grasu até chegar em 5 graus
refrigeração: no máximo 48hrs
colocar palheta em caixa de isopor + suporte e bandeja de metal --> palhetas a 5cm do nitrogenio, 15-20min até atingir -100 graus
estouro: temperatura inadequada
palheta boiando: excesso de ar
aprovadas são armazenadas no botijão
Coleta de sêmen
técnicas
eletroejaculação
técnica mais utilizada em bovinos (preferência) = menor risco em coleta
gera maior volume
vagina artificial
libido necessária
urina da fêmea no manequim
contagem espermática
cálculo
: (n/2) x 5 x 10 x 1000 x vt
avaliação
motilidade total
percentual de células móveis
motilidade progressiva
movimento linear
vigor
turbilhonamento
movimento de massa
agregados
morfologia
defeitos maiores
até 20% tolerado
defeitos menores
70% funcional, máximo de 30% defeitos
coloração
amarelo
pus (vesiculite)
vermelho
rompimento de vasos (uretra ou vesiculite com bactérias hemolíticas
Inseminação
cadela
infertilidade
adquirida (coudi)
pode ser realizada a coleta de sêmen
congênita (generandi)
reprovado em exame andrológico
ciclo
fêmea aceita o macho no final do proestro
estro dividido em tempos
2d - liberação do óvulo
2-5d maturação do óvulo
após a maturação que vai virar Oovócito II
momento chave para realização da IA
usar citologia: se 80% estiver em estro, está adequado
dosagem de progesterona
4-10mg = estro
ovulação ocorre em 5mg
cuidado: maior de 5mg fica dificil em acompanhar exatamento o momento do ciclo
<0,5mg esperar 7 dias
2-3mg ovulação próxima (48hrs)
4-8mg momento chave
3x IA é o ideal
preconizar funod de vagina ou útero
pipeta + seringa --> massagear a vulva + inclinação de 30graus/10min
vacas
convencional
objetivo: erradicar ou controlar doenças, reduzir custo de produção e seleção genética = aumento no rendimento e qualidade de carcaça + corrigir características indesejadas
deposição do sêmen
corpo do útero (passar a cérvix)
com auxilio da palpação retal, introdzir o aplicador e ultrapassar os anés cartilaginosos, aplicar o sêmen
spermvital: imobiliza o sêmen e gruda no útero da vaca fazendo uma liberação gradativa ao longo do dia
detecção de cio
período do cio: 3x dia por 40min (geralmente à noite)
AM/PM
cio de manhã = inseminar à tarde
cio à noite = inseminar no outro dia pela manhã
alteração pré-cio
edema de vulva, corrimento vaginal cristalino, cauda erguida e arrepiada, aumento da micção, vocalização, monta em fêmeas e afastamento do rebanho
mecanismos detectores
dosagem de progesterona
pedômetros, feitos de mercuro que sinalizam o movjmento do animal
sistemas de rádio/ colares automatizados que oferecem dados em tempo real
adesivos, bussal marcador são técnicas que mostram a tentativa do macho em montar na fêmea
materiais
botijão, régua, sêmen, luva de palpação, bainha de IA, aplicador de sêmen, termômetro, cortador de palhetas, pinça antômicas, papel toalha e descongelador de sêmen
IATF
técnica voltada para o melhoramento, diferente da convencional essa não requer observar comportamento de cio, além disso é uma técnica de massificação (muitas vacas inseminadas em 1 dia)
sincronização do ciclo
controle do corpo lúteo
sincronização da ovulação
média 1 bezerro/ vaca/ ano
vantagens
maior número de vacas inseminadas, melhoramento genético, padronização, redução do intervalo entre partos, concentração dos nascimentos em épocas mais favoráveis, redução de 30/50% no número de touro para repasse, estímulo à ciclicidade
metodologia
teórica
sincronnizar a emergência de uma nova onda folicular
ovulação ou atresia folicular controlada
GnRH ou P4+E2
controlar a duração da fase luteal
PG
induzir a ovulação
prática
D0 do protocolo
2mg de benzoato de E2 + implante de P4
D8 do protocolo
300ul eCG + 0,5mg cipionato de E2 + 25mg PGF2a + retirada do implante de P4
D10 do protocolo
IATF
fármacos de controle
P4 ou progestágenos
controle do crescimento folicular
dispositivos intravaginais
deposição constante de P4
PGF2a
encurta a duração da fase luteal
eCG
maturação folicular (ação similar do FSH)
indicado em fêmeas com anestro ou em protocolo com progesterona
GnRH
estimula a secreção e pico de LH
LH
indutor de ovulação
E2
indutor do pico de LH e promotor de atresia folicular
leiteiras
peculiaridade fisiológica
apresenta uma alta conversão e metaboliação da gordura o que leva a alta taxa de metabolização hepática de esteroides (clearence hormonal)
menos progesterona e estogênio
mais difícil detectar o cio, pois tem menos sinais (e2)
menos ovulações, menores folículos, menores corpo lúteos e mior índice de morte fetal/ embrionária
alta ingestão de matéria seca
IATF
D0 do protocolo
GnRH 2x + implante de P4
D8 do protocolo
300ul eCG + 0,5mg cipionato de E2 + 25mg PGF2a + retirada do implante
D10 do protocolo
IATF