Practica 8: Pruebas bioquímicas.
Prueba 1: prueba de la catalasa.
Colocar en un portaobjetos dos gotas de peróxido de hidrogeno.
Tomar una colonia de bacterias y se coloca en una de las gotas.
La prueba se considera positiva y esta reacciona sacando burbujas.
Prueba 2: prueba de la oxidasa.
Se coloca un reactivo (TMFD) en el cultivo.
Se puede saber que una prueba es positiva si hay oxidación en el reactivo (como un halo morado).
Prueba 3: Prueba de SIM
Permite detectar la presencia de sulfuro, indol y motilidad bacteriana
Para el test de indol: colocar de dos a tres gotas de reactivo Kovács. La formación de un anillo rojo quiere decir que es positivo. Si hay un anillo amarillo quiere decir que la prueba es negativa.
Para sulfuro: Ennegrecimiento de la lineal de siembra.
Motilidad positiva es por observarse crecimiento de bacterias en zonas aledañas al sitio de incubación.
Prueba 4: Prueba de hemolisis
Siembra en agar sangre
Hemolisis Alpha: halos verdes
Hemolisis beta: Halos transparentes
Hemolisis gamma: no hay hemolisis
Prueba 5: Prueba de ureasa
Siembra de agar urea al 20%
Si el color de medio es amarillo naranja la prueba es negativa y si es rojo fucsia la prueba es positiva.
Se le agrega indicador de pH rojo fenol
Prueba 6: Prueba TSI
Si loa bacteria problema fermenta en la glucosa acidifica el medio haciendo mirar amarillo el indicador en el fondo del tubo. Si no es fermentador de glucosa permanecerá de color rojo.
Si produce acido sulfhídrico se podrá ver ennegrecimiento del tubo.
Si hay movimiento en el tubo quiere decir que es productora de gas.
Prueba 8: Prueba en agar Simmons citrato
El color azul indica una prueba positiva, indicativo que hay crecimiento de gérmenes que utilizan el citrato como fuente de carbono.
El test negativo no hay crecimiento ni cambio de color.
Prueba 9: prueba de la lisina descarboxilasa
Si el microorganismo produce la enzima lisina descarboxilasa, mostrara una reacción alcalina atreves del medio, el fondo del tubo y la parte inclinada permanece de color purpura. Si presente ennegrecimiento en el medio el microorganismo es sulfuro positivo.
La prueba es negativa si se observa color amarillo en el medio.
La prueba es útil para la identificación de enterobacterias.
Prueba 10: prueba de manitol
Se usa agar salado de manitol.
Permite el crecimiento de un determinado grupo de bacterias, mientras que inhibe el de otros contiene una alta concentración de cloruro de sodio del 7.5% haciendo selectivo para además manitol y el rojo de fenol como indicador de pH, si un organismo es capaz de fermentar el manitol, subproducto acido es creado que hace que el rojo de fenol cambie a amarillo.
José Alberto Valenzuela Ochoa