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Manipulação Gênica, Amanda Carbonari - SPGR 010783 - Coggle Diagram
Manipulação Gênica
Enzimas Utilizadas
Nucleases
Endonucleases
Utilizadas como
Enzimas de Restrição
Utilizadas para
Romper ligações fosfodiesteres
Quebrar sítios palindrômicos
Originando
Fragmentos coesivos
Fragmentos cegos
Exonucleases
São
Ação tempo dependente
Utilizadas para
Quebrar extremidades
Digerir fragmentos de DNA que não sejam circulares
Ligases
Função
Enzima de adesão de DNA
Polimerase
Função
Replicação do DNA
A partir de uma fita molde
Sentido 5' -> 3'
Transcriptase Reversa
Função
Sintese de DNA a partir de uma fita de RNA
Quinase
Função
Adição de fosfato
Extremidade 5'
Fosfatase
Função
Retiram fosfato
Extremidade 5'
Clonagem
Etapa 1
Selecionar vetor
Plasmideo
Possui estrutura
Gene de Resistencia
Origem da Replicação
Promotor
Sítio múltiplo de clonagem
Etapa 2
Isolamento e digestão do DNA
São utilizadas
Enzimas de restrição
Etapa 3
Ligação dos fragmentos no vetor
Utiliza-se
Ligase
Liga fitas complementares
Etapa 4
Transferencia
Tornam a célula quimicamente competente
Utiliza-se
Choque Térmico
Etapa 5
Seleção dos clones recombinantes
Utilizando
Antibiótico
Gene de resistência a antibiótico
Ocorre
Morte das células sem o plasmídeo
Ficam as células que possuem o plasmídeo
Usada em clonagem
Possibilita produzir
Transgenicos
Clones
Terapia Genica
Proteínas Recombinantes
Vacinas DNA ou RNA
Proteínas Recombinantes
utilizadas para
Estudar estrutura e função das proteínas
Imunização e produção de anticorpos
Medicamentos Biológicos
pode-se utilizar
Leveduras
Bactérias
Fungo filamentosos
Célula Vegetal
Célula de Mamífero
Temos proteínas de
Fusão
Glutationa S-Tranferase
Reporter
Tag de Histidina
para purifica-las
Cromatografia de Afinidade
utiliza-se
Coluna com glutationa
Afinidade por GST
Colona com Níquel ou Cobalto
Afinidade por Histidina
indutor da expressão dessas
IPTG
Editores de Genoma
existem 3
ZNF
características
Reconhecem sequência específica
através das
Proteínas dedo de zinco
Possuem de 1 a 5 dominios
Constituído por
Dominios
Cada domínio reconhece uma trinca de nucleotídeos
Nucleases
Fok-1
Quebram o DNA no local de interesse
Dimerizados
Linquer
Ligacao entre nuclease e domínio
TALEN
Constituído por
Dominios
Cada domínio reconhece 1 nucleotídeo
Nucleases
Fok-1
Linquer
Ligacao nuclease + domínio
CRISPR
Constituído por
Cas9
a qual
Quebra o gene
Desnatura o gene
gRNA
formado por
crRNA
tracrRNA
o qual promove
Estabilização da molécula
Direcionamento
"Consertam um problema no DNA"
Mecanismos de Reparo
Nao Homologa
mediado por
Complexo Ku/70/80
Dependente de homologia
mediado por
Fita molde
Rad51
DNA polimerase
Terapia Celular
CAR-T CELL
são
Células T que expressam um receptor CAR
constituido por
scFV
Hinge
Dominio transmembrana
Domínio intermembrana
promovem a
Apoptose de células tumorais
Perforinas
Granzimas
apresentam
Resultados promissores para leucemias e linfomas
iPSC
é uma
Célula pluripotente induzida
produzida através de
Celulas somaticas
que
Incorporam 4 fatores de transcrição em seu genoma
Oct4
Sox2
c-Myc
Klf4
podem ser utilizadas
Produção de Organoides
Bioimpressão Tridimensional
Aptameros
são
Moléculas simples fita
que adquirem
Forma Tridimenssional
através de
Dobramentos
selecionados através
SELEX
caracterizados por
Maior afinidade
Baixo custo
Maior especificidade
Baixa toxicidade
Amanda Carbonari - SPGR 010783