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Practica 4: Tinción de Gram, José Alberto Valenzuela Ochoa - Coggle Diagram
Practica 4: Tinción de Gram
Materiales
Mechero
Piseta
Cultivo de bacterias
Porta objetos
Asa bacteriológica
Y las tinciones de Gram
Cristal violeta
Safranina
Lugol
Alcohol acetona
Puente de vidrio
Microscopio óptico
Técnica
Paso 1. Se coloca el porta objetos ya con la bacteria sobre el puente de vidrio.
Posteriormente se le coloca el colorante primario, que es el cristal violeta.
Se cubre el frotis tratando que no se escurra el colorante.
Se deja actuar por un minuto
Pasando este tiempo se le retira el colorante y se lava con el agua de la piseta hasta que el agua salga incolora.
Paso 2. Se coloca el segundo reactivo que es el Lugol.
Se deja actuar al Lugol por un minuto.
El Lugol funciona como mordente, para aumentar la unión del colorante y el sustrato.
Transcurrido el tiempo se escurre el exceso de Lugol y se lava con agua.
Paso 3. Punto Critico.
Este paso es el punto critico ya que es el momento donde se diferencia las bacterias Gram positivas y Gram negativas.
Se le coloca unas gotas de alcohol acetona, hasta que el reactivo salga incoloro.
Inmediatamente se lava con el agua de la piseta.
Paso 4: Coloración con safranina
Después de haber retirado el alcohol se le coloca unas gotas de safranina
Se deja actuar directamente en el frotis.
Pasado el tiempo se escurre la safranina y se lavaba con el agua de la piseta. Y después se dejan secar las muestras.
Observación de la muestra.
Primero se ve la muestra con el objetivo de 10X para identificar el campo microscópico.
Se afina el la imagen con el objetivo de 40X
Se coloca una gota de aceite de inmersión y se coloca el objetivo de 100X
Observamos las bacterias, que por lo general puede ser:
Cocos
Agrupaciones
Diplococos
Estafilococos
Estreptococos
Sarcinas
Tétradas
Bacilos
Cocobacilo
Diplobacilos
Estreptobacilos
Empalizada
Letras chinas
Identificación de Gram
Gram Positivas
Gram Negativas
José Alberto Valenzuela Ochoa
