Posee una estructura más compleja, en la que tiene hasta 5 capas dispuestas entre la membrana citoplasmática y otra capa externa, entre ellas está el espacio periplasmático, en el que hay 5 capas, alternándose capas claras (L2 y L5) entre capas oscuras (L1, L3, L4) siendo la capa 4 de peptidoglucano o mureína, esta capa es más delgada que en bacterias Gram positivas. La pared celular se compone además de lipoproteínas y lipopolisacáridos, que representan el 80% del peso seco de la pared. Al darse una unión entre cadenas polisacáridas solo participa un 50% de tetrapéptidos, este débil porcentaje de unión entre los péptidos crea poros, son estos huecos los que hacen difícil la tinción, ya que el colorante sale (Iáñez E, 2003); (Padial J, s/f) & (Raisman J, 2005).
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