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Sequenciamento do DNA, Fragmento Klenow = dois terços da DNA-polimerase I,…
Sequenciamento do DNA
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Tipos
Tradicional
- 1° geração
- Gilbert, Sanger
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Nanotecnologia
- 3° geração
- SMRT, oxford nanopore
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- Processo que determina a ordem dos nucleotídeos e um segmento do DNA
- Fornece informações: estrutura, função e relações evolutivas com outros genes
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Fragmentos de maior peso ficam na parte superior do gel. Os de peso menor ficam na parte inferior.
A LEITURA É FEITA DE BAIXO PARA CIMA
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Quando os didesoxi são incorporados, eles não têm o O no C3' da sua pentose e a polimerização. Se não há polimerização a formação da cadeia é interrompida.
- (Sequenciamento da Roche) Pirosequenciamento :arrow_right: a incorporação de um nucleotídeo é traduzida pela emissão de luz por ação da luciferase
- (Sequenciamento da Illumina) Sequenciamento por síntese :arrow_right: requer que as sequências a serem determinadas sejam convertidas numa biblioteca de sequenciamento especial, permitindo a amplificação e imobilização das sequências para serem submetidas à sequenciamento
- (Ion Torrent) :arrow_right: utiliza microchip para detectar a incorporação do dNTP através da diferença de pH
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- Sequenciamento SMRT (pacific biosciences)