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Preparo de amostras e diluições, pegar 1 ml da mistura da amostra e…
Preparo de amostras e diluições
preparo dos recipientes utilizados
trituração (homogeneização) da amostra
25 gramas ou mililitros
agua peptonada
225 ml
facilita a contabilização
mistura da amostra com a agua peptonada
homogeneizado manualmente ou com equipamento
diluir 1 ml da mistura em tubo com 9 ml de agua peptonada
repetir de um tubo pro outro 2 vezes (3 tubos)
homogenizar cada tubo
uso de proteção do manipulador
esterilização do local de trabalho
Teste Presuntivo (NMP)
numerar 9 tubos de ensaio
tubo de Durham invertido
teste de fermentação de lactose
com pipetas diferentes
3 pra cada diluição
com 10 ml de caldo LST
Teste Confirmativo
contar quantos tubos deram positivo e de qual serie
aparência turva e bolha de gás
presume a presença de coliformes
vide tabela
numerar 3 tubos com caldo verde brilhante e 3 com caldo EC
colocar 1 ml de um tubo positivo para coliformes e colocar no caldo VB e 1 ml do mesmo tubo positivo para tubo com caldo EC (repetir em cada tubo positivo)
repetição com pipetas diferentes
esterilizar a abertura dos tubos
homogeneizar os tubos
deixar encubado em estufa a 35 graus por 48h os tubos de caldo VB e deixar encubado em equipamento banho maria a 44,5 graus por 24h os tubos de caldo EC
os tubos com caldo VB confirmam coliformes totais se turvam e criam forma gás e os tubos com caldo EC confirmam a presença de
E. coli
se tiverem gas
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pegar 1 ml da mistura da amostra e colocar na primeira serie de 3 tubos (1 ml em cada tubo)
pegar 1 ml da primeira serie de cada tubo e colocar na segunda serie (1 ml em cada tubo)
pegar 1 ml da segunda serie de cada tubo e colocar na terceira serie (1 ml em cada tubo)
homogenizar
deixar todos os tubos por 48h na estufa a 45 graus
esterilizar a ponta do tubo
homogenizar
esterilizar a ponta do tubo
homogenizar
esterilizar a ponta do tubo