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Obtención y análisis de fracciones celulares - Coggle Diagram

- - - - Método más utilizado para poder separar en fracciones los componentes celulares libres.
    - - ¿Qué es?
        
        Serie de centrifugados, cada vez a mayor velocidad y mayor duración.
      - Características
        
        Componentes subcelulares separados por tamaño y densidad.
        
        Sedimentación rápida y con componentes grandes y densos.
      - Procedimiento
        
        Rotura mecánica de las células (homogeneizador mecánico)
        
        Homogeneización de células, en una solución amortiguada isotónica (contiene sacarosa a menudo), para prevenir rotura de vesículas de membrana.
        
        Se somete el homogeneizado a centrifugación diferencial
        
        Fuerza centrífuga 800G por 10 minutos, para separar en el pellet núcleos y células completas
        
        Fuerzas 15000G por 10 minutos, para separar en el sedimento mitocondrias, lisosomas y peroxisomas
        
        Fuerzas 100 000G por 60 minutos, para separar en el pellet membrana celular y retículo endoplasmático.
        
        Fuerzas 200 000G por 3 horas, para separar en el pellet ribosomas
        
        El sobrenadante vendría a ser el citosol
    - - ¿Qué es?
        
        Es la purificación adicional mediante centrifugación de una fracción
      - ¿En qué consiste?
        
        Se usa una solución que al mezclarse con el buffer distribuye el contenido de la muestra en capas o fracciones, según su densidad.
    - - Tiempo
      - Temperatura (0 – 5°C): Evitar perder actividad biológica.
      - Velocidad
  - - - En disgregar los tejidos en las células que los componen y realizar la lisis de las células para lograr la liberación de componentes celulares (organelos) sin que sufran daños.
    - - Mecánico
        
        Trituradores
        
        Molienda
        
        Homogeneizadores
        
        Homogeneizador potter
      - No mecánico
        
        Enzimático
        
        Lisis enzimática
        
        Lisozimas
        
        Químico
        
        Detergentes
        
        SDS
        
        Solubiliza y desnaturaliza proteínas
        
        TritónX100
        
        No desnaturaliza proteínas
        
        Solventes
        
        Físico
        
        Choque térmico
        
        Cambio brusco en la temperatura
        
        Ultrasonido
        
        Fuerza de sonido
        
        Choque osmótico
        
        Ambiente o medio hipotónico (lisis)
    - - Solución isotónica
        tamponada (presión osmótica adecuada)
      - Tipos
        
        PMFS
        
        Inhibidor de proteasas
        
        Solución de NaCl al 0,9%
        
        Buffer Tris
        
        Sal básica
        
        Ácido EDTA
        
        Atrapa iones calcio o magnesio
  - - - separación de componentes no deseados de la suspensión celular mediante un medio poroso, pasando solo el líquido.
      - filtración gruesa a través de una gasa para eliminar los restos del tejido o las células intactas que no hayan sido fraccionadas.