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Métodos de extracción ADN - Coggle Diagram
Métodos de extracción ADN
Pasos
Aislamiento de ADN
Métodos fisicoquímicos (precipitación en isopropanol, etanol, fenol-cloroformo-isoamilico, silice, electroforesis)
Recolección y concentración de ADN
Fase acuosa (Tris-EDTA)
Lisis celular
Alteración de membranas celulares, separar ácidos nucleicos de proteínas
Muestras de fuente única
Pruebas de paternidad (relación de parentesco)
Generación bases de datos ADN
Muestras de referencias
Ventajas: gran cantidad de ADN, recolección y almacenamiento en un ambiente controlado,menos probabilidad de degradación, inhibidores minimos PCR
Desventajas : variación por el tipo de fluido biológico (sangre, saliva, células bucales)
Muestras de evidencia
Variables e impredecibles, exposición a condiciones ambientales, presentan inhibidores de PCR y cantidades limitadas
Casos de agresión sexual
Mezclas espermatozoides y células epiteliales vaginales, se extrae por lisis diferencial para separar fracciones y deconvolución de los donantes en la muestra mixta.
Huesos y dientes
Casos de desastres masivos antigüos,personas desaparecidas
Muestras no homogéneas
Métodos para disolver la matriz ósea, EDTA, SDS, proteinasa K, desmineralización
Automatización
Ventajas
Mantener la integridad de la muestra, mayor reproducibilidad, mayor rendimiento, integración del flujo de trabajo, minimiza los errores, reduce el tiempo
Métodos
Chelex
El reactivo quelante se utiliza para unirse a sustancias inorgánicas y limpiar el extracto de ADN de inhibidores.
FTA
Se conserva a T ambiente varios años, contiene químicos que lisan las células, desactivan las nucleasas y previenen el crecimiento de bacterias.
Métodos de extracción en dos pasos
Fenol/cloroformo
Método de extracción orgánica, se basa en la propiedades e interacciones físicas y químicas de los reactivos y materiales celulares
Extracción a base de sílice
Método de afinidad, se basa en partículas de vidrio uniéndose activamente al isotiocianato que a su vez está unido al guanidio, Los grupos de amina cargados en el guanidio actúan como enlace para los grupos fosfato cargados negativamente en el ADN
Salinización saturada
Las sales precipitarán las proteínas, y actúan de manera muy similar al fenol/cloroformo.