Métodos de extracción ADN
Pasos
Muestras de fuente única
Muestras de evidencia
Automatización
Aislamiento de ADN
Recolección y concentración de ADN
Lisis celular
Alteración de membranas celulares, separar ácidos nucleicos de proteínas
Métodos fisicoquímicos (precipitación en isopropanol, etanol, fenol-cloroformo-isoamilico, silice, electroforesis)
Fase acuosa (Tris-EDTA)
Pruebas de paternidad (relación de parentesco)
Generación bases de datos ADN
Muestras de referencias
Ventajas: gran cantidad de ADN, recolección y almacenamiento en un ambiente controlado,menos probabilidad de degradación, inhibidores minimos PCR
Desventajas : variación por el tipo de fluido biológico (sangre, saliva, células bucales)
Métodos
Variables e impredecibles, exposición a condiciones ambientales, presentan inhibidores de PCR y cantidades limitadas
Casos de agresión sexual
Huesos y dientes
Mezclas espermatozoides y células epiteliales vaginales, se extrae por lisis diferencial para separar fracciones y deconvolución de los donantes en la muestra mixta.
Casos de desastres masivos antigüos,personas desaparecidas
Muestras no homogéneas
Métodos para disolver la matriz ósea, EDTA, SDS, proteinasa K, desmineralización
Chelex
FTA
El reactivo quelante se utiliza para unirse a sustancias inorgánicas y limpiar el extracto de ADN de inhibidores.
Métodos de extracción en dos pasos
Se conserva a T ambiente varios años, contiene químicos que lisan las células, desactivan las nucleasas y previenen el crecimiento de bacterias.
Fenol/cloroformo
Extracción a base de sílice
Método de extracción orgánica, se basa en la propiedades e interacciones físicas y químicas de los reactivos y materiales celulares
Método de afinidad, se basa en partículas de vidrio uniéndose activamente al isotiocianato que a su vez está unido al guanidio, Los grupos de amina cargados en el guanidio actúan como enlace para los grupos fosfato cargados negativamente en el ADN
Salinización saturada
Las sales precipitarán las proteínas, y actúan de manera muy similar al fenol/cloroformo.
Ventajas
Mantener la integridad de la muestra, mayor reproducibilidad, mayor rendimiento, integración del flujo de trabajo, minimiza los errores, reduce el tiempo