Métodos de extracción ADN

Pasos

Muestras de fuente única

Muestras de evidencia

Automatización

Aislamiento de ADN

Recolección y concentración de ADN

Lisis celular

Alteración de membranas celulares, separar ácidos nucleicos de proteínas

Métodos fisicoquímicos (precipitación en isopropanol, etanol, fenol-cloroformo-isoamilico, silice, electroforesis)

Fase acuosa (Tris-EDTA)

Pruebas de paternidad (relación de parentesco)

Generación bases de datos ADN

Muestras de referencias

Ventajas: gran cantidad de ADN, recolección y almacenamiento en un ambiente controlado,menos probabilidad de degradación, inhibidores minimos PCR

Desventajas : variación por el tipo de fluido biológico (sangre, saliva, células bucales)

Métodos

Variables e impredecibles, exposición a condiciones ambientales, presentan inhibidores de PCR y cantidades limitadas

Casos de agresión sexual

Huesos y dientes

Mezclas espermatozoides y células epiteliales vaginales, se extrae por lisis diferencial para separar fracciones y deconvolución de los donantes en la muestra mixta.

Casos de desastres masivos antigüos,personas desaparecidas

Muestras no homogéneas

Métodos para disolver la matriz ósea, EDTA, SDS, proteinasa K, desmineralización

Chelex

FTA

El reactivo quelante se utiliza para unirse a sustancias inorgánicas y limpiar el extracto de ADN de inhibidores.

Métodos de extracción en dos pasos

Se conserva a T ambiente varios años, contiene químicos que lisan las células, desactivan las nucleasas y previenen el crecimiento de bacterias.

Fenol/cloroformo

Extracción a base de sílice

Método de extracción orgánica, se basa en la propiedades e interacciones físicas y químicas de los reactivos y materiales celulares

Método de afinidad, se basa en partículas de vidrio uniéndose activamente al isotiocianato que a su vez está unido al guanidio, Los grupos de amina cargados en el guanidio actúan como enlace para los grupos fosfato cargados negativamente en el ADN

Salinización saturada

Las sales precipitarán las proteínas, y actúan de manera muy similar al fenol/cloroformo.

Ventajas

Mantener la integridad de la muestra, mayor reproducibilidad, mayor rendimiento, integración del flujo de trabajo, minimiza los errores, reduce el tiempo