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20ml 改良MS培养基, 拟南芥Col-0培养, 放假啊开始发生大离开家离开家, 1ml 经过3天培养的拟南芥Col-0细胞悬液, 管状分子的诱导…

- - - - 用5ml 新鲜培养基清洗四次后
        
        转移至改良MS固体培养基
        
        0.4% 结冷胶
        
        500mg/L 头孢噻肟
        
        100mg/L 硫酸卡那霉素
        
        三周培养
        
        将出现的愈伤组织转移至新的平板上并独立培养
        
        每个约1cm 愈伤组织转移到含有20ml 改良MS液体培养液的100 mL 培养瓶
        
        23℃ 130 rmp 黑暗振荡培养
        
        2周后
        
        在荧光显微镜下通过GFP荧光挑选合适的细胞
        
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- - - - 含有1μM 油菜素内酯
      - 23℃ 130 rmp 黑暗振荡培养
- - - - 梯度乙醇脱水
        
        梯度为50,60,70,80,90,99.5,100%
        
        每次20min
        
        technovit 7100 树脂包埋
        
        使用超薄切片机切取0.4μm厚度的样本
        
        0.1% TBO,100 mM PBS,pH 7.0中染色1min
- - - - 封闭
        
        0.1 M Gly
        
        1% 牛血清白蛋白
        
        0.05% Triton X-100
        
        孵育15min
        
        PBS
        
        20mM 磷酸钠
        
        150 mM NaCl
        
        pH =7
        
        一抗PBS孵育1h
        
        小鼠抗鸡α-微管蛋白
        
        PBS冲洗三次
        
        二抗PBS孵育1h
        
        罗丹明山羊抗小鼠抗体
        
        PBS冲洗三次
        
        用含抗淬灭剂的甘油溶液封片
- - - - 30 或 60 min 观察