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Processamento Histológico - Coggle Diagram
Processamento Histológico
7- Coloração do material = Essa etapa segue um protocolo pré-estabelecido. Tempo total aproximado é 47 minutos.
Desparafinar com Xilol por 2 min (3x)
Lavar com álcool absoluto (100%) por 2 min (2x); Depois lavar com álcool 90% por 2 min; Depois lavar com álcool 70% por 2 min
Lavar com água corrente por 2 min
Lavar rapidamente com água destilada por 30 s
Corar com Hematoxilina por 3 à 6 min
Lavar em água corrente por 2 min
Lavar em álcool 70% por 2 min
Corar com Eosina por 3 à 7 min
Lavar com álcool 90% por 2 min; Depois lavar com álcool absoluto por 2 min (3x)
Limpar com xilol por 2 min (3x)
Montar as lâminas e cobrias com lamelas utilizando DePeX (bálsamo?)
6- Cortes (Incorporação) = Após a formação do bloco de parafina, estes são acoplados ao micrótomo com um molde para se iniciar os cortes. Após o corte, a fina fita de material é colocada em um recipiente com água morna, e então colocada na lâmina de vidro
1- Fixação com formol = Endurecer e preservar o tecido para os posteriores passos do processamento. Ideal é de 06h a 24h de processamento
3- Desidratação do material = Haja visto que a parafina é hidrofóbica, existe necessidade de retirar o excesso de água do material para que haja infiltração com a cera. A ideia é colocar o material em soluções de álcool cada vez mais concentradas até atingir o puro, totalmente sem água. Aqui, o material costuma perder cerca de 20% do seu tamanho
90% por 15 min
100% por 15 min
70% por 15 min
100% por 15 min
100% por 30 min
100% por 45 min
4- "Clearing" = Apesar de o material agora já não conter basicamente nenhuma água, ainda há necessidade de "limpar" esse material do álcool, haja visto que a parafina não consegue penetrar e se misturar com etanol. Nesse processo, a gordura também é retirada (essa também não se mistura com a cera da parafina). Geralmente o material utilizado é o xilol, porém este é tóxico. Uma alternativa é o isopropanol
Xilol por 20 min
Xilol por 45 min
Xilol por 20 min
2- Exame macroscópico
5- Infiltração por cera = Apesar da parafina ser a mais utilizada, outros materiais também são apropriados. A parafina líquida infiltra o material a 60ºC, e depois é resfriada a 20ºC tornando-se sólida e adquirindo uma consistência ótima para o corte. A parafina pode ser misturada com polietileno ou estireno. Essas misturas proporcionam que os cortes possam ser realizados até a espessura de pelo menos 2 µm.
Cera por 30 min
Cera por 45 min
Cera por 30 min