Cromatografia líquida de alta resolucion. HPLC
Instrumentacion
Repertorio de fase móvil y sistemas de tratamiento de disolventes
Los instrumentos modernos de HPLC están equipados con uno o mas repertorios de vidrio, cada uno contiene un mínimo de 500 ml de disolvente
sistema de burbujeo
Proceso en el que los gases disueltos se eliminan de un disolvente por medio de burbujas de un gas inerte e insoluble.
Elucion isocrática
Elucion en gradiente
en HPLC es aquella en la cual la composición de disolvente permanece constante
en HPLC es aquella en la cual la composición de disolvente se cambia de manera continua o en una serie de pasos
Sistemas de bombeo
Requerimentos para las bombas utilizadas utilizadas en cromatografia liquida
- la generación de presiones de mas de 6000
- Salida libre de pulsos
- velocidades de flujo de 0.1 mL/min
- Reproducibilidades de flujo relativas de 0.5% o mejores
- Resistencia a la corrosión por una variedad de disolventes
Se utilizan 2 tipos principales de bombas en los instrumentos de HPLC
Bombas tipo jeringa impulsadas por tornillos
Bombas de tipo émbolo
capacidad baja 250 ml aproximadamente, poco practicas al momento de cambiar disloventes
HPLC utilizan bombas de doble cabeza o cámaras elípticas para minimizar las pulsaciones
ventajas
pequeño volumen interno y su alta presión de salida, su facilidad para adaptarlas a la elucion en gradiente y su velocidad de flujo constante
sistema de inyección de muestra
Método mas utilizado para introducir las muestras en cromatografia liquida se basa en un asa de muestras
Columnas para HPCL
Son de tubería de acero inoxidable , de vidrio o de polímeros , acero inoxidable recubiertas de vidrio o peek, los precios varían de 200 a 500 dolares
Columnas analiticas
tienen una longitud de entre 5 y 25 cm y diámetro interno de 3 a 5 um, siempre son rectas, El tamaño de partículas mas comunes para los empacamientos es de 3 a 5 um.
Las columnas mas utilizadas tienen de 10 a 15 cm de largo, 4.6 mm de diámetro interno y esta empacadas con partículas de 5 um.
Precolumnas
de desperdicios
Entre el contenedor de la fase movil y el inyector para acondicionar la fase movil
de proteccion
Entre el inyector y la columna analítica remueve partículas y otras impurezas del disolvente
Control de temperatura de la columna
Temperatura constante de decimas de grado con respecto a la temperatura ambiente hasta los 150 grados C
Empacamiento de columna
partículas peculiares
Partículas porosas
Detectores para HPLC
Debe de tener un volumen interno pequeño (volumen muerto)
detector debe ser pequeño y compatible con el flujo de liquido
Los detectores mas utilizados para cromatografia liquida están basados en la absorción de radiación ultravioleta o visible
Referencia :F. James Holler, Stanley R. Crouch, (2014), "Fundamentos de Química Analítica", (novena edición), México, D.F. Learning Editores, S.A de C,V Cengage Learning, Inc. Cap.33 A CROMATOGRAFIA DE ALTA RESOLUCION
Andrea Alejandra Lopez Muñoz. 208-18-5101