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五对小鼠（WT和KO）, 数据分析 - Coggle Diagram
五对小鼠（WT和KO）
分离全骨髓细胞，滤网过滤，获得单细胞悬液
9、取一部分离心后加入总铁检测试剂盒相关试剂，检测总铁含量
8、取一部分离心后提取总蛋白，用于检测血红素合成相关蛋白表达
7、检测细胞血红素和铁卟林含量
6、分离线粒体，检测细胞线粒体血红素和铁卟林含量
5、重新检测骨髓CD3e+、CD4+、
CD8+ T细胞数量和百分比？使用Counting Beads计数？
取一部分，Biotin分离Ter119+细胞
3、每个样本取至少200万细胞冻存于负八十度，用于细胞代谢组学。分离的线粒体可以做代谢组学吗？
4、取一部分Ter119+固定于预冷的戊二醛，用于透射电镜
2、流式检测TER119、CD71、CD44和Hoches33342
1、流式检测MitoSox、线粒体膜电位（TMRM）、线粒体ROS颔联（DHE）
小鼠摘眼球取血，均分到抗凝管和普通EP管。
普通EP管4度过夜放置，次日分离血清
1、检测铁含量
2、检测总铁结合力？
抗凝管外周血
1、生理盐水溶血实验
2、检测两组小鼠血红素含量
3、检测两组小鼠铁卟林含量
摘取胸腺
1、称重，计算胸腺和体重百分比
2、重新检测胸腺CD3e+、CD4+、
CD8+ T细胞数量和百分比？
脾脏摘取，称重
立即使用研钵研磨，研磨后使用滤网过滤，获得脾脏单细胞 :
1、取一部分离心后加入总铁检测试剂盒相关试剂，检测总铁含量
2、取一部分离心后提取总RNA，可先加入Trizol，冻于负八十度，次日提取，用于RNAseq差异基因表达验证
3、取一部分离心后提取总蛋白，用于检测血红素合成相关蛋白表达
4、检测细胞血红素和铁卟林含量
6、重新检测脾脏CD3e+、CD4+、CD8+ T细胞数量和百分比？使用Counting Beads计数？
7、流式检测TER119、CD71、CD44和Hoches33342
8、流式检测MitoSox、线粒体膜电位（TMRM）、线粒体ROS含量（DHE）
5、分离线粒体，检测细胞线粒体血红素和铁卟林含量
分离十二指肠
预冷生理盐水清洗内容物
1、取一截固定于中性福尔马林溶液，用于普鲁士蓝染色
2、需要研磨后检测总铁含量和FPN1等蛋白的表达？
摘取肝脏
立即使用研钵研磨，研磨后使用滤网过滤，获得肝脏单细胞
5、检测血红素和铁卟林含量
4、取一部分离心后提取总蛋白，用于检测FPN1蛋白表达，肝脏也是血红素合成的重要场所（19%），用于检测血红素合成相关蛋白表达
3、取一部分离心后提取总RNA，可先加入Trizol，冻于负八十度，次日提取，用于检测Hepcidin等指标差异
2、取一部分离心后加入总铁检测试剂盒相关试剂，检测总铁含量
1、取一定体积离心后立即冻于负八十度，用于RNAseq测序。肝脏摘取前是否需要先进行心脏灌注？灌注是否会影响到骨髓细胞分离？
称重
数据分析
RNAseq结果分析
1、差异基因成图
2、将FDR小于0.05的基因的可变剪切可视化，以及可变剪切差异基因的功能富集
3、WGCNA分析
4、将人的测序数据与鼠的测序数据联合分析
流式分析：Rbm38敲除后对造血干祖细胞的影响
GEO数据库相关数据分析
将Rbm38课题所有结果整理成可供发表习形式
蛋白定量结果是否要催一下？刚好可以将蛋白与RNAseq结果联合分析