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Herramientas utilizadas por la genética molecular humana - Coggle Diagram
Herramientas utilizadas por la genética molecular humana
Caracterizar la base molecular de las mutaciones causantes de enfermedades genéticas y utilizar información para mejorar los métodos diagnósticos y los tratamientos
Análisis de secuencias individuales de DNA y RNA
Obstáculos
Obtener cantidad suficiente de DNA o RNA de interés
Aislamiento de la secuencia de interés respecto a todo el resto de segmentos de DNA y moléculas de mRNA
Revoluciones tecnológicas
Clonación molecular
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
Clonación molecular
Aislar gen o secuencia de DNA y amplificarlo en cantidades suficientes para su estudio
Su proceso implica la transferencia de una secuencia de DNA a una célula de un microorganismo
Se cultiva microorganismo para que produzca secuencia de DNA con su propio DNA
Enzimas de restricción
Reconocen secuencias de doble cadena específicas en el DNA y las escinden a nivel de los elementos fosfodiéster de la doble hélice del DNA
Vectores
Molécula de DNA que puede replicarse de manera autónoma en el huésped
Células de levadura
Bacterias
Puede ser aislado en forma pura para ser analizado
Plásmido
Moléculas de DNA circular de doble cadena, son naturales, están presentes en bacterias y levaduras
Se mantienen separados y se replican de forma independiente de los cromosomas del propio microorganismo
Tienen un origen de replicación
Uno o más marcadores
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Métodos de análisis de los ácidos nucléicos
Transferencia Southern
Detección y análisis de un subconjunto de fragmentos de DNA de interés existente en un conjunto poco informativo, 1 millón de fragmentos obtenidos por las enzimas de restricción
Requiere a detección de segmentos de DNA o moléculas de RNA determinados
Análisis con sondas de oligonucleótidos con especificidad de alelo
Identificación precisa de una determinada secuencia de DNA y puede distinguir entre individuos portadores de la secuencia mutante en ambos cromosomas e individuos portadores de la secuencia normal en un cromosoma y de la secuencia mutante en otro
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Transferencia de Northen
Determinar el tamaño y abundancia de un mRNA derivado de un determinado gen en una muestra de RNA
Genotecas
Colección de clones, cada uno contiene un vector al que se le ha insertado un fragmento diferente del DNA derivado del DNA o RNA total de una célula/tejido
Genoteca genómica
Contiene fragmentos del DNA genómico generado mediante digestión parcial por cantidades limitadas de una enzima de restricción
Hace cortes en sitios con una frecuencia elevada en el genoma
Genoteca de DNA complementario (cDNA)
Se usa para aislar genes de DNA complementario que contiene copias de cDNA de la población de mRNA de un tejido
El clon obtenido tendrá solamente los exones de un gen
La clonación de cDNA está basada en la acción de la transcriptasa inversa, DNA polimerasa dependiente de RNA derivada de retrovirus
Cribado de genoteca por hibridación son sondas de ácidos nucléicos
Es para identificar un clon que contiene el inserto de interés