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RICONOSCIMENTO PREPARATO ISTOLOGICO - Coggle Diagram
RICONOSCIMENTO PREPARATO ISTOLOGICO
COME SI STUDIANO LE CELLULE?
BIOCHIMICICO
,NATURA CHIMICA DELLA CELLULA, ACCANTO A QUESTA VI E' L'
ISTOCHIMICA
CHE LOCALIZZA LE SOSTANZEMCHIMICHE ANCHE NEI COSTITUENTI INTERCELLULARI DEI TESSUTI
FUNZIONALE
, MODALITA' DI FUNZIONAMENTO DELLA CELLULA
ANALISI MORFOLOGICA
, PER CONOSCERE LA FORMA, DIMENSIONI, DISTRIBUZIONE E RAPPORTI E ORGANIZZAZIONE DELLA CELLULA
I METODI DI OSSERVAZIONE MORFOLOGICA O MICROSCOPICA
METODI PER OSSERVAZIONE DIRETTA
, DANNO IMMAGINE REALE E DINAMICA DELLA CELLULA, MA SOPRAVVIVONOPER BREVI TEMPI UNA VOLTA ISOLATI DALL'ORGANISMO, TRANNE SE COLTIVATI IN VITRO
METODI PER L'OSSERVAZIONE DI PREPARATI FISSI E COLORATI
SI AVVALE DI
MICROSCOPI
,
INGRANDIMENTO
, RAPPORTO TRA DIMENSIONE DELL'IMMAGINE AL MICROSCOPIO E DIMENSIONE REALE DELL'OGETTO
CONTRASTO
, DIPENDE DALLE DIFFERENZE DI ASSORBIMENTO DELLA LUCE; I COMPONENTI DELLA CELLULE SONO IN GRAN PARTE TRASPARENTI, LO SCARSO ASSORBIMENTO DI LUCE DIPENDE DALLA ELEVATA CONCENTRAZIONE DI ACQUA, MA BASTA UTILIZZARE DEI
COLORANTI ISTOLOGICI
PER AUMENTARLO
MICROSCOPIA IN CONTRASTO DI FASE
, LE DIFFERENZE POSSONO ESSERE AMPLIFICATE E TRASFORMATE IN CAMBIAMENTI DI AMPIEZZA; CONSENTE UN AUMENTO DEL CONTRASTO NON DEL POTERE RISOLUTIVO
MICROSCOPIA AD INTERFERENZA
, SIMILE A QUELLO DEL CONTRASTO DI FASE MA FORNISCE DATI QUANTITATIVI SULLA MASSA SECCA DELLE VARIE STRUTTURE CELLULARI
SI BASANO SULFATTO CHE LE STRUTTURE BIOLOGICHE PRESENTANO LIEVI DIFFERENZE NELL'INDICE DI RIFRAZIONE CHE DETERMINANO PICCOLI CAMBIAMENTI DI FASE NELLE RADIAZIONI TRASMESSE ATTRAVERSO DI ESSE
POTERE DI RISOLUZIONE
,DISTANZA MINIMA DALLA QUALE DUE PUNTI RISULTANO DISTINTI, DIPENDE DALLA LUNGHEZZA D'ONDA DELLA LUCE E DALL'APERTURA NUMERICA DELLA LENTE DELL'OBIETTIVO
IMMUNOISTOCHIMICA
MICROSCOPI
MICROSCOPIA IN CAMPO OSCURO
SI COMPONE DI UN MICROSCOPIO OTTICO DOVE IL CONDENSATORE A LUCE TRASMESSA E' SOSTITUITO DA UN
CONDENSATORE CHE ILLUMINA OBLIQUAMENTE
L'OGGETTO, IN TAL MODO LE STRUTTURE CELLULARI APPAIONO BRILLANTI MENTRE IL FONDO RIMANE SCURO
MICROSCOPIA A LUCE POLARIZZATA
PER CERTE STRUTTURE CELLULARI CRISTALLINE CHE PRESENTANO UN ELEVATO GRADO DI ORIENTAMENTO CELLULARE, NON TRASMETTONO LA LUCE CON LA STESSA VELOCITA' IN TUTTE LE DIREZIONI, PERCHE' PRESENTANO INDICI DI RIFRAZIONE DIVERSI
UNA VOLTA CHE LA LUCE COLPISCE L'OGGETTO, IL RAGGIO SI DIVIDE IN DUE RAGGI POLARIZZATI IN DUE PIANI PERPENDICOLARI TRA LORO CHE SI PROPAGANO CON VELOCITA' DIVERSE
QUESTI OGGETTI VENGONO DEFINITI
BIRIFRANGENTI
MICROSCOPIO OTTICO
SI BASA SUL PRINCIO CHE UN FASCIO DI LUCE ATTRAVERSA LA STRUTTURA DA STUDIARE E L'IMMAGINE GIUNGE INGRANDITA ALL'OCCHIO, OCCORRE CHE IL PUNTO MATERIALE SIA ATTRAVERSABILE DALLA LUCE E NON VI SIANO SOVRAPPOSIZIONI TRA CELLULE
OCCORE EFFETTUARE SEZIONI DEI TESSUTI DA OSSERVARE, CHE PRESENTINO UNOSPESSORE TALE DA NON SUPERARE LE DIMENSIONI DELLA CELLULA
POTERE DI RISOLUZIONE: 0,25 MICROMETRI
MICROSCOPIA A FLUORESCENZA
ALCUNE SOSTANZE SE ILLUMINATE DA LUCE ULTRAVIOLETTA EMMETONO LUCE VISBILE E POSSONO ESSERE RILEVATE
IL PREPARATO E' ILLUMINATO DA LUCE ULTRAVIOLETTA
MICROSCOPIA CONFOCALE
UTILIZZA UNA SORGENTE LUMINOSA LASER E UN SISTEMA OTTICO ED ELETTRONICO CHE PERMETTE DI EFFETTUARE LA SCANSIONE DI UNA O PIU' SEZIONI DEI CAMPIONI OSSERVATI
MICROSCOPIA ELETTRONICA
POTERE DI RISOLUZIONE DI 0,9 NM
UTILIZZO DI UN FASCIO DI ELETTRONI EMESSI DA UN CATODO E ACCELERATI NEL VUOTO
LE LENTI SONO SOSTITUITE DA UN CAMPO ELETTROSTATICO O ELETTROMAGNETICO CHE DEFLETTE GLI ELETTRONI
ESISTONO DUE TIPI DI MICROSCOPI ELETTRONICI
A TRASMISSIONE,
TEM
A SCANSIONE,
SEM
, POTERE RISOLUTIVO MINORE MA VALUTA IL RILIEVO DEGLI OGGETTI
MICROSCOPIA A FORZA ATOMICA
FORNISCE IMMAGINI CON UN PROFI TRIDIMENSIONALE DELLA SUPERFICI, RISOLUZIONE 1 NM
PRESERVAZIONE CAMPIONI TISSUTALI
INCLUSIONE E SELEZIONAMENTO
, VIENE UTILIZZATO IL
MICROTOMO
PER SEZIONARE I TESSUTI , IN 3-10 MICROMETRI
DATO CHE SI OTTIENE UNA SERIE DI FRAMMENTI VIENE UTILIZZATA LA
PARAFFINA
PER INCLUNDERE IL FRAMMENTOPER RENDERLO MISCIBILE CON LA PARAFFINE SI SOSTITUISCE L'ACQUA DEL TESSUTO PRIMA CON ALCOL ETILICO E POI CON UN SOLVENTE DI PARAFFINA STESSA,
XILOLO
UN CAMPIONE CONGELATO HA CONSISTENZA ADATTA PER ESSERE SEZIONATO ADOPERANDO UN
CRIOSTATO
, AL CUI INTERNO VIENE MANTENUTA TEMP. DI CONGELAMENTO. LA SOSTANZA PUO' QUINDI ESSERE SCONGELATA E COLORATA PER L'OSSERVAZIONE
CONSENTE DI PRESERVARE DEI DEPOSITI DI LIPIDI
NON VI E' DENATURAZIONE DELLE PROTEINE, CONSENTENDO DI INDIVIDUARE ATTIVITA' ENZIMATICHE
MOLTO RAPIDO ,
INCLUSIONE IN UN MATERIALE PIU' DURO,
RESINA EPOSSIDICA
, GRAZIE ALL'
ULTRAMICROTROMO
CONSENTE DI OTTENERE SEZIONI SOTTILI, PER IL ME. ,E SEMISOTTILI PER MO.
FISSAZIONE
, TENDE A CONSERVARE LA STRUTTURA DI CAMPIONI BIOLOGICI MANTENENDO INALTERATA LA STRUTTURA ORIGINARIA, DEVE ESSERE EFFETTUATA SUBITO DOPO IL PRELIEVO DALL'ORGANISMO
IMPLICA LA MORTE DELLE CELLULE E DENATURAZIONE DI PROTEINE, INOLTRE RENDE INSOLUBILI LE MACROMOLECOLE PRESENTI, MANTENENDOLE LOCALIZZATE NELLE STRUTTURE CHE NE FANNO PARTE
USATI COME
FISSATORI
: ALCOLI ETILICO E EMETILICO E LE ALDEIDI
IL CONGELAMENTO VELOCE
E' UNA ALTERNATIVA, PIU' RAPIDO DEGLI AGENTI FISSATORI MA DANNEGGIA L'ORGANIZZAZIONE COMPLESSIVA
VENGONO IMMERSI PICCOLI VOLUMI DI MATERIALE BIOLOGICO IN AZOTO LIQUIDO, PUO' ESSERE APPLICATO ANCHE A CELLULE VIVE CHE DOPO RIPRENDONO IL LORO NORMALE FUNZIONAMENTO
COME RENDERE VISIBILI CELLLULE TRASPARENTI
VENGONO USATI COLORANTI, MOLECOLE IDROSOLUBILI, LE SEZIONI DA COLORARE DEVONO ESSERE PRIVATE DI PARAFFINA CHE LE RENDONO IMPERMEABILI MEDIANTE XILOLO E REIDRATARE ATTRAVERSO ALCOL ETILICO SEMPRE PIU' DILUITO IN ACQUA
TIPI DI COLORANTI
BASICI,
EMATOSSILINA, HANNO AFFINITA' PER MOLECOLE ACIDE COME DNA
ACIDI
, EOSINA, SI LEGANO A MOLECOLE BASICHE
LE COLORAZIONI PORTANO A DEFINIRE ALCUNE MOLECOLE
ACIDOFILE
O
BASOFILE
METACROMASIA
, PROPRITA' DI ALCUNI COMPOSTI CHIMICI DI ASSUMERE CON CERTI COLORANTI BASICI UNA TINTA DIVERSA DAL TIPO DI COLORANTE IMPIEGATO
COLORAZIONE VITALE
, SE IL COLORANTE E' INIETTATO NELL'ANIMALE VIVO
COLORAZIONE SOPRAVITALE
, SE IL COLORANTE E' SOMMINISTRATO A TESSUTI O CELLULE ISOLATI
COLTURA IN VITRO
, MANTENERE IN VITA CELLULE SINGOLE O FRAMMENTI DI TESSUTI E DI ORGANI AL DI FUORI DELL'ORGANISMO AL QUALE APPARTENGONO
INCUBATE IN UN MEZZO NUTRITIVO ADATTO, SOLUZIONI TAMPONATE CON AGGIUNTA DI SIERO DI VITELLO O UOMO O CAVALLO. E CONDIZIONI DI TEMPERATURA OTTIMALI DI 37°
IN ASSENZA DI BATTERI, MEDIANTE UTILIZZO DI MATERIALE STERILE MONOUSO, STERILIZZAZIONE STRUMENTI
CAPACI DI SOPRAVVIVERE E DIVIDERSI MANTENENDO LE LORO CARATTERISTICHE SPECIFICHE
DA LA POSSIBILITA' DI PRODURRE TESSUTI ARTIFICIALI IN VITRO DA IMPIANTARE POI IN PAZIENTI E TROVA SPAZIO NELLA
MEDICINA RIGENERATIVA
CRESCERE E MODIFICARE GENETICAMENTE IN VITRO CELLULE DI UN ORGANISMO E REIMPIANTARLE NELLO STESSO PER OVVIARE AD ANOMALIE GENETICHE