RICONOSCIMENTO PREPARATO ISTOLOGICO

COME SI STUDIANO LE CELLULE?

BIOCHIMICICO,NATURA CHIMICA DELLA CELLULA, ACCANTO A QUESTA VI E' L'ISTOCHIMICA CHE LOCALIZZA LE SOSTANZEMCHIMICHE ANCHE NEI COSTITUENTI INTERCELLULARI DEI TESSUTI

FUNZIONALE, MODALITA' DI FUNZIONAMENTO DELLA CELLULA

ANALISI MORFOLOGICA, PER CONOSCERE LA FORMA, DIMENSIONI, DISTRIBUZIONE E RAPPORTI E ORGANIZZAZIONE DELLA CELLULA

I METODI DI OSSERVAZIONE MORFOLOGICA O MICROSCOPICA

METODI PER OSSERVAZIONE DIRETTA, DANNO IMMAGINE REALE E DINAMICA DELLA CELLULA, MA SOPRAVVIVONOPER BREVI TEMPI UNA VOLTA ISOLATI DALL'ORGANISMO, TRANNE SE COLTIVATI IN VITRO

METODI PER L'OSSERVAZIONE DI PREPARATI FISSI E COLORATI

SI AVVALE DI MICROSCOPI,

INGRANDIMENTO, RAPPORTO TRA DIMENSIONE DELL'IMMAGINE AL MICROSCOPIO E DIMENSIONE REALE DELL'OGETTO

CONTRASTO, DIPENDE DALLE DIFFERENZE DI ASSORBIMENTO DELLA LUCE; I COMPONENTI DELLA CELLULE SONO IN GRAN PARTE TRASPARENTI, LO SCARSO ASSORBIMENTO DI LUCE DIPENDE DALLA ELEVATA CONCENTRAZIONE DI ACQUA, MA BASTA UTILIZZARE DEI COLORANTI ISTOLOGICI

POTERE DI RISOLUZIONE,DISTANZA MINIMA DALLA QUALE DUE PUNTI RISULTANO DISTINTI, DIPENDE DALLA LUNGHEZZA D'ONDA DELLA LUCE E DALL'APERTURA NUMERICA DELLA LENTE DELL'OBIETTIVO

MICROSCOPI

MICROSCOPIA IN CAMPO OSCURO

MICROSCOPIA A LUCE POLARIZZATA

MICROSCOPIO OTTICO

SI BASA SUL PRINCIO CHE UN FASCIO DI LUCE ATTRAVERSA LA STRUTTURA DA STUDIARE E L'IMMAGINE GIUNGE INGRANDITA ALL'OCCHIO, OCCORRE CHE IL PUNTO MATERIALE SIA ATTRAVERSABILE DALLA LUCE E NON VI SIANO SOVRAPPOSIZIONI TRA CELLULE

OCCORE EFFETTUARE SEZIONI DEI TESSUTI DA OSSERVARE, CHE PRESENTINO UNOSPESSORE TALE DA NON SUPERARE LE DIMENSIONI DELLA CELLULA

POTERE DI RISOLUZIONE: 0,25 MICROMETRI

PER AUMENTARLO

MICROSCOPIA IN CONTRASTO DI FASE, LE DIFFERENZE POSSONO ESSERE AMPLIFICATE E TRASFORMATE IN CAMBIAMENTI DI AMPIEZZA; CONSENTE UN AUMENTO DEL CONTRASTO NON DEL POTERE RISOLUTIVO

MICROSCOPIA AD INTERFERENZA, SIMILE A QUELLO DEL CONTRASTO DI FASE MA FORNISCE DATI QUANTITATIVI SULLA MASSA SECCA DELLE VARIE STRUTTURE CELLULARI

SI BASANO SULFATTO CHE LE STRUTTURE BIOLOGICHE PRESENTANO LIEVI DIFFERENZE NELL'INDICE DI RIFRAZIONE CHE DETERMINANO PICCOLI CAMBIAMENTI DI FASE NELLE RADIAZIONI TRASMESSE ATTRAVERSO DI ESSE

SI COMPONE DI UN MICROSCOPIO OTTICO DOVE IL CONDENSATORE A LUCE TRASMESSA E' SOSTITUITO DA UN CONDENSATORE CHE ILLUMINA OBLIQUAMENTE L'OGGETTO, IN TAL MODO LE STRUTTURE CELLULARI APPAIONO BRILLANTI MENTRE IL FONDO RIMANE SCURO

PER CERTE STRUTTURE CELLULARI CRISTALLINE CHE PRESENTANO UN ELEVATO GRADO DI ORIENTAMENTO CELLULARE, NON TRASMETTONO LA LUCE CON LA STESSA VELOCITA' IN TUTTE LE DIREZIONI, PERCHE' PRESENTANO INDICI DI RIFRAZIONE DIVERSI

UNA VOLTA CHE LA LUCE COLPISCE L'OGGETTO, IL RAGGIO SI DIVIDE IN DUE RAGGI POLARIZZATI IN DUE PIANI PERPENDICOLARI TRA LORO CHE SI PROPAGANO CON VELOCITA' DIVERSE

QUESTI OGGETTI VENGONO DEFINITI BIRIFRANGENTI

MICROSCOPIA A FLUORESCENZA

ALCUNE SOSTANZE SE ILLUMINATE DA LUCE ULTRAVIOLETTA EMMETONO LUCE VISBILE E POSSONO ESSERE RILEVATE

IL PREPARATO E' ILLUMINATO DA LUCE ULTRAVIOLETTA

MICROSCOPIA CONFOCALE

UTILIZZA UNA SORGENTE LUMINOSA LASER E UN SISTEMA OTTICO ED ELETTRONICO CHE PERMETTE DI EFFETTUARE LA SCANSIONE DI UNA O PIU' SEZIONI DEI CAMPIONI OSSERVATI

MICROSCOPIA ELETTRONICA

POTERE DI RISOLUZIONE DI 0,9 NM

UTILIZZO DI UN FASCIO DI ELETTRONI EMESSI DA UN CATODO E ACCELERATI NEL VUOTO

LE LENTI SONO SOSTITUITE DA UN CAMPO ELETTROSTATICO O ELETTROMAGNETICO CHE DEFLETTE GLI ELETTRONI

ESISTONO DUE TIPI DI MICROSCOPI ELETTRONICI

A TRASMISSIONE,TEM

A SCANSIONE, SEM, POTERE RISOLUTIVO MINORE MA VALUTA IL RILIEVO DEGLI OGGETTI

MICROSCOPIA A FORZA ATOMICA

FORNISCE IMMAGINI CON UN PROFI TRIDIMENSIONALE DELLA SUPERFICI, RISOLUZIONE 1 NM

PRESERVAZIONE CAMPIONI TISSUTALI

INCLUSIONE E SELEZIONAMENTO, VIENE UTILIZZATO IL MICROTOMO PER SEZIONARE I TESSUTI , IN 3-10 MICROMETRI

FISSAZIONE, TENDE A CONSERVARE LA STRUTTURA DI CAMPIONI BIOLOGICI MANTENENDO INALTERATA LA STRUTTURA ORIGINARIA, DEVE ESSERE EFFETTUATA SUBITO DOPO IL PRELIEVO DALL'ORGANISMO

IMPLICA LA MORTE DELLE CELLULE E DENATURAZIONE DI PROTEINE, INOLTRE RENDE INSOLUBILI LE MACROMOLECOLE PRESENTI, MANTENENDOLE LOCALIZZATE NELLE STRUTTURE CHE NE FANNO PARTE

USATI COME FISSATORI: ALCOLI ETILICO E EMETILICO E LE ALDEIDI

IL CONGELAMENTO VELOCE E' UNA ALTERNATIVA, PIU' RAPIDO DEGLI AGENTI FISSATORI MA DANNEGGIA L'ORGANIZZAZIONE COMPLESSIVA

VENGONO IMMERSI PICCOLI VOLUMI DI MATERIALE BIOLOGICO IN AZOTO LIQUIDO, PUO' ESSERE APPLICATO ANCHE A CELLULE VIVE CHE DOPO RIPRENDONO IL LORO NORMALE FUNZIONAMENTO

DATO CHE SI OTTIENE UNA SERIE DI FRAMMENTI VIENE UTILIZZATA LA PARAFFINA PER INCLUNDERE IL FRAMMENTOPER RENDERLO MISCIBILE CON LA PARAFFINE SI SOSTITUISCE L'ACQUA DEL TESSUTO PRIMA CON ALCOL ETILICO E POI CON UN SOLVENTE DI PARAFFINA STESSA, XILOLO

UN CAMPIONE CONGELATO HA CONSISTENZA ADATTA PER ESSERE SEZIONATO ADOPERANDO UN CRIOSTATO, AL CUI INTERNO VIENE MANTENUTA TEMP. DI CONGELAMENTO. LA SOSTANZA PUO' QUINDI ESSERE SCONGELATA E COLORATA PER L'OSSERVAZIONE

CONSENTE DI PRESERVARE DEI DEPOSITI DI LIPIDI

NON VI E' DENATURAZIONE DELLE PROTEINE, CONSENTENDO DI INDIVIDUARE ATTIVITA' ENZIMATICHE

MOLTO RAPIDO ,

INCLUSIONE IN UN MATERIALE PIU' DURO, RESINA EPOSSIDICA, GRAZIE ALL'ULTRAMICROTROMO CONSENTE DI OTTENERE SEZIONI SOTTILI, PER IL ME. ,E SEMISOTTILI PER MO.

COME RENDERE VISIBILI CELLLULE TRASPARENTI

VENGONO USATI COLORANTI, MOLECOLE IDROSOLUBILI, LE SEZIONI DA COLORARE DEVONO ESSERE PRIVATE DI PARAFFINA CHE LE RENDONO IMPERMEABILI MEDIANTE XILOLO E REIDRATARE ATTRAVERSO ALCOL ETILICO SEMPRE PIU' DILUITO IN ACQUA

TIPI DI COLORANTI

BASICI, EMATOSSILINA, HANNO AFFINITA' PER MOLECOLE ACIDE COME DNA

ACIDI, EOSINA, SI LEGANO A MOLECOLE BASICHE

LE COLORAZIONI PORTANO A DEFINIRE ALCUNE MOLECOLE ACIDOFILE O BASOFILE

METACROMASIA, PROPRITA' DI ALCUNI COMPOSTI CHIMICI DI ASSUMERE CON CERTI COLORANTI BASICI UNA TINTA DIVERSA DAL TIPO DI COLORANTE IMPIEGATO

COLORAZIONE VITALE, SE IL COLORANTE E' INIETTATO NELL'ANIMALE VIVO

COLORAZIONE SOPRAVITALE, SE IL COLORANTE E' SOMMINISTRATO A TESSUTI O CELLULE ISOLATI

COLTURA IN VITRO, MANTENERE IN VITA CELLULE SINGOLE O FRAMMENTI DI TESSUTI E DI ORGANI AL DI FUORI DELL'ORGANISMO AL QUALE APPARTENGONO

IMMUNOISTOCHIMICA

INCUBATE IN UN MEZZO NUTRITIVO ADATTO, SOLUZIONI TAMPONATE CON AGGIUNTA DI SIERO DI VITELLO O UOMO O CAVALLO. E CONDIZIONI DI TEMPERATURA OTTIMALI DI 37°

IN ASSENZA DI BATTERI, MEDIANTE UTILIZZO DI MATERIALE STERILE MONOUSO, STERILIZZAZIONE STRUMENTI

CAPACI DI SOPRAVVIVERE E DIVIDERSI MANTENENDO LE LORO CARATTERISTICHE SPECIFICHE

DA LA POSSIBILITA' DI PRODURRE TESSUTI ARTIFICIALI IN VITRO DA IMPIANTARE POI IN PAZIENTI E TROVA SPAZIO NELLA MEDICINA RIGENERATIVA

CRESCERE E MODIFICARE GENETICAMENTE IN VITRO CELLULE DI UN ORGANISMO E REIMPIANTARLE NELLO STESSO PER OVVIARE AD ANOMALIE GENETICHE