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Practica No. 3 "Preparación de un inoculo viral"., José Alberto…
Practica No. 3 "Preparación de un inoculo viral".
Los virus se pueden identificar realizando un diagnostico directo o uno indirecto.
Directo
Se realiza en la fase aguda de la enfermedad por medio del aislamiento viral, esto se logra con la preparación de un inoculo (sobrenadante de la muestra sospechosa)
Indirecto
Se lleva a cabo en la fase convaleciente de la enfermedad, justamente cuando la producción de anticuerpos es elevada y estos pueden ser detectados por medio de pruebas serológicas.
Objetivo
El alumno preparará un inoculo para realizar el aislamiento viral de una muestra sospechosa.
Procedimiento
Material
Muestra sospechosa
Mortero
SSF
Tubos estériles
Antibióticos
Centrifuga
Medios de cultivo para detectar microorganismos aerobios y anaerobios
Método
1.- Trabajar junto a un mechero
2.- Pesar 1 gr de muestra.
3.- Colocar el tejido en un mortero y comenzar a macerar en seco, en caso de que se trate de un tejido fibroso, utilizar un abrasivo como la arena estéril.
4.- Adicionar poco a poco el diluyente necesario para preparar una suspensión al 10 - 20%
5.- Transferir la suspensión a tubo estéril.
6.- Centrifugar la suspensión 1500 r.p.m por 10 minutos.
7.- Obtener el sobrenadante en un tubo estéril.
8.- Añadir antibióticos (1000 - 10,000 U.I. de penicilina y 1 - 10 mg de estreptomicina por ml de inoculo.
9.- Dejar actuar el antibiótico por 5 - 15 minutos.
10.- Realizar el control de esterilidad bacteriana en medios sintéticos para aerobios y anaerobios (agar triptosa y caldo tioglicolato respectivamente) sembrando 0.1 ml del inoculo en cada medio.
11.- Incubar a 37°C por 24 horas.
12.- Realizar la lectura de la prueba de esterilidad (comprobar que no haya crecimiento bacteriano).
13.- Inocular en el sistema huésped elegido para aislamiento e identificación.
José Alberto Valenzuela Ochoa