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Elaboración del biosensor de células completas - Coggle Diagram
Elaboración del biosensor
de células completas
Plásmido del biosensor
de resistencia al arsénico
Mediante amplificación por
PCR del elemento sensor
de arsenito (Pars y arsR)
Utilizando ADN genómico
de
E. coli DH5
como plantilla
Cebadores
Diseñados con los sitios
de corte de las enzimas
de restricción.
El fragmento de ADN
amplificado se purificó
y dirigió con BamHI y
EcoRI.
Se insertó en el plásmido
pCDFDuet-1.
Produjo pCDF-As.
Gen
mCherry
Amplificado a partir del
plásmido
pmCherry
usando los cebadores 2F y 2R
Fragmento resultante
Se clonó en los sitios de restricción
EcoRI y Notl del pCDF-As.
Produciendo el plásmido
pCDF As-mCherry
El fragmento de ADN de304pb se dirigió
con EcoRI y Notl para después implantarse
en el plásmido pCDF As para dar pCDF As
luxR
.
Plásmido de expresión
luxR
Se construyó amplificando
el gen
luxR
del plásmido
pGN68 usando los cebadores
3F y 3R.
Producto PCR
resultante
Se dirigió con EcoRI y
BamHI.
Se subclonó en los sitios
respectivos de pGN68.
Produjo plásmido pGN68
mCherry
.
Todas las construcciones se confirmaron mediante PCR/electroforesis en gel y secuenciación de Sanger.