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APLICACIONES Y TÉCNICAS DE DIAGNÓSTICO MEDIANTE EL USO DE CUTIVOS…
APLICACIONES Y TÉCNICAS DE DIAGNÓSTICO MEDIANTE EL USO DE CUTIVOS CELULARES
ABERRACIONES CROMOSOMICAS
TIPOS
ALTERACIONES NUMERICAS
SUBTIPOS
ANEPLOIDAS: cuando afecta a algún par de cromosomas
SUBSUBTIPOS
TRISOMIA
MONOSOMIA
POLIPLOIDAS: todos los pares de cromosomas son alterados.
ALTERACIONES ESTRUCTURALES
TIPOS
TRANSLOCACIÓN: cromosoma rota o fragmentada pasa material genético de una a otra.
DELECIÓN: pierde parte de cromosomas.
INVERSIÓN: dentro del mismo cromosoma, hay una transferencia genética, de arriba abajo.
DEFINICIÓN
Son defectos o alteraciones en estructura o numero de los cromosomas
1. CROMOSOMAS
DEFINICIÓN
TIPOS
METACÉNTRICO: los brazos iguales.
SUBMETACÉNTRICO: brazos cortos más cortos que los brazos largos.
ACROCÉNTRICO: brazos corto mucho mas cortos que los brazos lagos.
TELOCÉNTRICO: sin brazos cortos.
Estructuras formadas por ADN compacto, polisacaridos y proteinas.
En nucleo de las celulas.
4.3 INMUNOENSAYO ENZIMATICO (ELISA)
TIPOS ELISA
ELISA INDIRECTO (detecta Ac)
PROCEDIMIENTO
3. Adición del Ac secundario marcado con la enzima: se une al Ac primario.
4. Adición del sustrato: reaccionando con la enzima y proporciona una señal visible que permite la detección y/o cuantificación Ag
2. Adición del Ac primario sin marcar: se une al Ag.
1. Inmovilización del Ag sobre una placa.
ELISA COMPETITIVO (detecta Ag)
PROCEDIMIENTO
3. Adición del complejo Ag- Ac a la placa, donde Ag de referencia competirá con Ag de la muestra por unirse al Ac.
4. Lavado de la placa: eliminación del complejo Ag-Ac solubles.
2. Incubación de un exceso de Ac primario con la muestra que contiene el Ag de interés.
5. Adición a la placa de Ac secundario marcado con la enzima: se unirá al Ac primario.
1. Inmovilización del Ag de referencia sobre una placa.
6. Adición del sustrato: reacciona con la enzima y proporciona una señal visible que será inversamente proporcional a la cantidad de Ag de interés.
ELISA DIRECTO (detecta Ag)
PROCEDIMIENTO
2. Adición del Ac primario marcado con la enzima.
3. Adición del sustrato: reacciona con la enzima y proporciona una señal visible que permite la detección y/o cuantificación
1. Inmovilización del Ag sobre una placa.
DEFINICIÓN
Técnica de laboratorio que utiliza enzimas para marcar el complejo Ag- Ac.
CITOGENÉTICA Y BANDEO CROMOSÓMICO
CITOGENÉTICA
DEFINICIÓN
Ciencia encargada del estudio de cromosomas y enfermedades relacionado con ellos.
TRADICIONAL: bandeo cromosómico.
MOLECULAR: biología molecular.
2.1 OBTENCIÓN DEL CARIOTIPO
CARIOTIPO
DEFINICIÓN
Conjunto de cromosomas que tiene un individuo.
IDIOGRAMA
DEFINICIÓN
Representación gráfica de los cromosomas de un individuo, según su tamaño y forma de la posición del cromosoma.
Se ordena de mayor a menos, el par sexual al final.
PROCEDIMIENTO
4. Exposición de la muestra a solución hipotónica ( liberar cromosomas).
3. Adición de Colchicina.
1. Recolección de la muestra.
5. Lavados con solución fijadora (Acético:Metanol 1:3)
6. Colocación de la muestra en portaobjetos.
7. Tinción de la muestra: Técnicas de Bandeo.
2. Cultivo celular.
TÉCNICAS DE BANDEO
DEFINICIÓN
Tinción de los cromosomas de una muestra (segmentos o bandas de los cromosomas)
BANDEO C: colorante (Giemsa), resultados (se tiñe regiones centroméricas de cromosomas)
BANDEO Q: colorante (quinacrina), resultado (bandas brillantes A y T), utilidad (en desuso).
BANDEO R: colorante (quinacrina), resultados (bandas oscuras C y G, bandas claras A y T), utilidad (conocer el estado de telómeros).
BANDEO G: colorante (tripsina+ Giemsa),resultado (bandas oscuras A y T, bandas claras C y G), utilidad (alteraciones de gran tamaño en cromosomas), ventaja (buena sensibilidad, fácil de realizar, más utilizada).
TIPOS
2.2 TEST DE MICRONUCLÉOS
DEFINICIÓN
Técnica que permite analizar el efecto genotóxico de sustancias o factores ambientales.
PROCEDIMIENTO
3. Extensión de la muestra en un portaobjetos.
4. Fijación de la muestra (Etanol 80%).
2. Cultivo celular.
5. Tinción de la muestra (naraja de acridina o hematoxilina-eosina).
6. Observación al microscopio.
1. Recolección de la muestra.
MICRONUCLÉOS
DEFINICIÓN
Fragmentos de cromosomas o cromosomas completos que se quedas fuera del núcleo.
3. TÉCNICAS DE INMUNOMARCAJE
INMUNOMARCAJE
DEFINICIÓN
Utilización de Ac marcados para la detección de Ag en tejido de estudio.
Basado en la unión Ag-Ac.
DIRECTO
INDIRECTO
4.2 RADIOINMUNOENSAYO
VENTAJA
Elevada sensibilidad
INCONVENIENTE
Trabaja con material radioactivo.
DEFINICIÓN
Técnica de laboratorio que utiliza isotopos radioactivos para marcar el complejo Ag- Ac.
Luego se procede a la lectura de la radioactividad para detectar dichos complejos y confirmar y/o cuantificar presencia de la proteína de interés en la muestra.
4. ANÁLISIS DE EXPRESIÓN DE PROTEINAS
INCONVENIENTES
1. Requiere precisión.
2. Elevado coste.
Técnica destructiva
VENTAJAS
2. Detección de varias proteínas simultáneamente.
3. Elevada sensibilidad.
1. Detección de nanogramos de proteínas.
4. Elevada especificidad.
PROCEDIMIENTO
3. Transferencia de proteínas.
4. Bloqueo de membranas.
2. Separación de las proteínas.
5. Detección de la proteína.
1. Obtención y preparación de la muestra.
4.1 INMUNOBLOTTING O WESTERN BLOT
DEFINICIÓN
Técnica de laboratorio que permite conocer la concentración de una proteína en la muestra.
Basado en especificidad de reconocimiento Ag-Ac.
TIPOS
TIPOS