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APLICACIONES Y TÉCNICAS DE DIAGNÓSTICO MEDIANTE EL USO DE CULTIVOS…
APLICACIONES Y TÉCNICAS DE DIAGNÓSTICO MEDIANTE EL USO DE CULTIVOS CELULARES.
INTRODUCCIÓN
Cromosomas
¿Qué son?
Estructuras formadas por ADN compactado, proteínas y polisacáridos y situados en el núcleo de las células.
Tipos de cromosomas según su forma y posición del centrómero.
¿Cuáles son?
Metacéntricos.
Brazos aprox. iguales y centrómero en el centro.
Agrocéntricos.
Centrómero en un extremo, solo existe un brazo.
Submetacéntricos.
Centrómero desplazado hacia un lado dando dos brazos desiguales.
Telocéntricos.
Centrómero cerca de un extremo, brazos desiguales.
CITOGENÉTICA Y BANDEO CROMOSÓMICO.
Citogenética
¿Qué es?
Ciencia encargada del estudio de los cromosomas y de las enfermedades relacionadas con ellos.
Idiograma
¿Qué es?
Representación gráfica de los cromosomas de un individuo, atendiendo a su tamaño y forma según la posición del centrómero.
Obtención de un cariotipo.
¿Cómo se realiza?
Recolección de la muestra.
Cultivo celular.
Adicionar inhibidor de mitosis.
Exposición a una solución hipotónica para liberación de los cromosomas.
Lavado con solución fijadora.
Colocar en portaobjetos.
Tinción de la muestra.
Bandeo cromosómico
¿Qué es?
Consiste en la tinción de los cromosomas de una muestra, que como resultado se observa diferentes segmentos o bandas en los cromosomas.
¿Cuáles son los tipos de bandeo?
Bandeo Nor.
Está en desuso.
Bandeo G.
Giemsa. Bandas oscuras (A y T) bandas claras (G y C).
Bandeo Q.
Quinacrina. Bandas brillantes (A y T).
Bandeo R.
Quinacrina. Bandas oscuras (C y G) bandas claras (A y T).
Bandeo C.
Giemsa. Tinción de regiones centroméricas.
Micronúcleos.
¿Qué es?
Fragmentos de cromosomas o cromosomas completos que se quedan fuera del núcleo.
Test de micronúcleos.
¿Qué es?
Técnica que permite analizar el efecto genotóxico de sustancias o factores ambientales.
¿Cuál es su procedimiento?
Recogida de muestra.
Cultivo celular.
Extensión en portaobjetos.
Fijar con etanol.
Teñir con naranja de acridina.
Observar al microscopio.
INMUNOMARCAJE.
¿Qué es?
Consiste en la utilización de Ac marcados para la detección de Ag en el tejido de estudio, basándose en la unión Ag-Ac.
ANÁLISIS DE EXPRESIÓN DE PROTEÍNAS.
WESTERN BLOT.
¿Qué es?
Técnica de laboratorio que permite conocer la concentración de una proteína en una muestra, basándose en la especificidad de reconocimiento Ag-Ac.
¿Cuáles son sus ventajas?
Detección de pequeñas concentraciones de proteínas.
Detección de varias proteínas simultáneamente.
Elevada sensibilidad y especificidad.
¿Cuáles son sus inconvenientes?
Requiere precisión.
Conlleva un alto coste.
Técnica destructiva.
¿Cuál es su procedimiento?
Obtención y preparación de la muestra.
Electroforesis en gel.
Transferencia de proteínas.
Bloqueo de membranas.
Detección de la proteína.
ELISA
¿Qué es?
Técnica de laboratorio que utiliza enzimas para marcar el complejo Ag-Ac.
¿Qué tipos de ELISA hay?
ELISA directo.
¿Cuál es su procedimiento?
Inmovilización Ag.
Adición del Ac primario.
Adición del sustrato.
Detección.
¿Para qué se utiliza?
Se utiliza para buscar el Ag en el paciente.
ELISA competitivo.
¿Cuál es su procedimiento?
Inmovilización del Ag de referencia.
Incubación Ac primario con Ag de interés.
Lavado.
Adición de Ac secundario.
Adición de sustrato.
Detección.
ELISA indirecto.
¿Cuál es su procedimiento?
Inmovilización del Ag.
Adición Ac primario sin marcar.
Adición Ac secundario marcado.
Adición del sustrato.
Detección.
¿Para qué se utiliza?
Se utiliza para buscar los Ac para dicho Ag en el paciente
RADIOINMUNOENSAYO.
¿Qué es?
Técnica de laboratorio que utiliza isótopos radiactivos para marcar el complejo Ag-Ac. Posteriormente se procede a la lectura de la radioactividad para detectar dichos complejos y confirmar y cuantificar la presencia de la proteína de interés en la muestra.
¿Cuáles son sus ventajas?
Elevada sensibilidad.
¿Cuáles son sus inconvenientes?
Trabaja con material radioactivo.