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Electroforesis SDS-PAGE - Coggle Diagram
Electroforesis SDS-PAGE
Es empleada por los científicos para para separar el ADN, el ARN, o
moléculas o proteínas en base a su tamaño y carga eléctrica.
La base de la técnica SDS-PAGE es hacer que el movimiento de la proteína en el soporte sólido (gel) por acción del campo eléctrico sea exclusivamente proporcional a su peso molecular.
Permite la separación de una mezcla de proteínas según su peso molecular, purificación de proteínas para su análisis por espectrometría de masas, estimación de peso molecular o identificación de variaciones en la expresión o estructura de proteínas.
Componentes del gel
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Ventajas
- Gran poder de separación por tamaño
- Transparentes (permite densitometría)
- Estables (pH, fuerza iónica, temperatura)
- Versatilidad en cuanto al tamaño de poro y entramado uniforme
Una de sus aplicaciones es ejemplo: "Evaluación de proteína de harina para diferentes genotipos de trigo harinero", donde se utilizó la técnica PAGE-SDS para estudiar las proteínas de la harina de trigo.
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Acrilamida, TEMED y persulfato de amonio,son la clave de mecanismo de polimerizacion, y N,N’-metilenbisacrilamida, son los componentes que componen el gel de poliacrilamida.
La electroforesis se puede realizar en condiciones nativas PAGE(No desnaturalizante)en base a su carga y tamaño, y en SDS PAGE(Si desnaturalizante) en base a su tamaño.En SDS se utilizan agentes desnaturalizantes de proteínas, como pueden ser: detergentes, caótropos, y agentes reductores (2- mercaptoetanol, DTT).
Existen dos sistemas de electroforesis de proteínas en geles depoliacrilamida en base a los búferes utilizados: El sistema continuo de Weber y Osborn donde existe un único gel separador, y El sistema discontinuo o de Laemmli donde existe un gel concentrador y un gel separador .
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