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Vibrio vulnificus review , 電子顯微鏡【流程】, Protease vs. Proteinase vs.…

- - - - (進一步地)了解該基因在【抵抗殺菌作用】及【感染過程】中的角色
      - 以期能對細菌感染控制有所助益
- - - - 文獻參考 - 1
- - - - 為什麼研究莢膜? capsule
        
        對很多細菌來說，莢膜是一個重要的致病因子。
        
        肺炎鏈球菌 Streptococcus pneumoniae
        
        克雷伯氏肺炎桿菌 Klebsiella pneumoniae
        
        先前研究表明：以大腸桿菌的莢膜突變株測試莢膜與毒力之間的關係
        
        有關文獻: 大腸桿菌致病因子的基因型特徵
        
        創傷弧菌對於血清敏感度測試實驗中發現，敏感度與菌落的多種不透明度有關，而菌落的多種部透明度又與莢膜的組成份有關。
        
        莢膜組成分 → 菌落不透明程度 → 對血清的敏感度
    - - 怎麼研究莢膜與基因型的關係?
        
        比較【有 / 無莢膜的相同基因型的菌株】
        
        V. vulnificus 371 取自海鮮 / 自然株 environmental strain
        
        V. vulnificus 374 取自敗血症病患血液 / 臨床株 clinical strain
        
        L-1 取自病患骨髓液
        
        L-180 取自病患血液
        
        養菌
        
        液態培養: 腦心浸培養基 (BHI medium / Brain Heart Infusion broth) + 0.9%NaCl
        
        固態培養: LB (lactose broth) + 2%、1.5%NaCl + agar
        
        條件一(養菌): 37°C, o/n, 5 ml
        
        條件二(預養): 37°C, 3-6 h, 5 ml + 0.1 culture(o/n)
        
        莢膜染色＆電子顯微鏡
        
        電子顯微鏡
        
        瓊脂醣 agarose (embedding)
        
        酒精 alcohol
        
        環氧丙烯 propylene oxide
        
        環氧樹脂 Epon
        
        醋酸鈾 uranyl acetate
        
        檸檬酸鉛 lead citrate
        
        釕紅染色
        
        菌體 bacterial pellets
        
        原理: 夾膜生成的地方(外膜外面)電子較密集
        
        比較：透明vs.不透明菌落的型態morphology / 每株菌的菌落都有透明&不透明的變種
        
        L-1、L-180具有較厚的夾膜
        
        371、374具有較斑駁且波浪狀的夾膜
        
        (透明) L-1、371、374 無明顯的細胞外物質extracellular materials；但是(透明) L-180有薄薄一層的細胞外物質；不過還是比(不透明)L-180還薄
        
        (不透明) L-1、371、374的夾膜物質(細胞外物質)若以india ink preparation(細菌鏡檢墨水染色)、Hiss method(夾膜染色)都是看不到的
      - 動物實驗
        
        母, 小鼠, 遠親雜交outbred, ddY品系 / 具備良好繁殖能力與生長定性
        
        公, 小鼠, 近親雜交inbred, C3H/He品系 / 可能具備【自發性骨骼過度增生的病變 / 可能形成腫瘤】
        
        公, 天竺鼠, 遠親雜交outbred, Hartley品系(哈氏) / guinea pig=天竺鼠
        
        條件: 養約10周，重量500-700克
        
        以靜脈注射LD50(Lethal Dose 50% / 半致死量)的0.2ml之1/10X稀釋過後的菌液(bacterial suspensions)
        
        以Reed-Muench方法計算死亡數量
      - 怎麼研究菌落的顏色的?
        
        固態培養(agar plate)直接觀察
        
        不透明 opaque(Op)
        
        透明 translucent(Tr)
        
        自然環境菌株 V. vulnificus 371
- - - - 1) 起因於【A型免疫球蛋白堆積於腎絲球內的環間膜內】
      - 2) 造成【免疫球蛋白(G、M型)、補體蛋白C3的共同堆積】