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Revisión de métodos de extracción de ADN a partir de restos óseos en el…
Revisión de métodos de extracción de ADN a partir de restos óseos
en el laboratorio forense
Introducción
En la actualidad, frecuentemente se producen circunstancias en las que aparecen restos humanos y/o cadáveres, que deben ser identificados .
El proceso de identificación suele tener una complejidad variable, que a menudo requiere de la intervención de equipos multidisciplinares.
Cuando nos enfrentamos a cadáveres bien conservados, existen multitud de herramientas que permiten resolver el proceso de identificación
Pero en muchos casos, estos métodos no pueden ser aplicados o se han de complementar, confirmar mediante el estudio comparativo del perfil de ADN genética.
La variabilidad en la preservación de las muestras que lleguen al laboratorio obliga a la aplicación de distintas estrategias para la extracción del material genético presente en dichas muestras.
De este modo, la presente revisión se centra en la valoración de los principales métodos de extracción de ADN a partir de las muestras de restos cadavéricosesqueletizados.
Factores que influyen en la preservación
del ADN
En el momento en que un organismo muere, comienzan los procesos de degradación de sus biomoléculas
La velocidad y el grado de descomposición del material genético de un resto va a depender de diversos factores endógenos y exógenos
El éxito en la obtención de información genética a partir de estructuras óseas está condicionado, aparte de por eltipo de estructura, por las condiciones del enterramiento.
Las características del ambiente en el que se encuentra depositado un resto pueden ralentizar o incluso detener el proceso de degradación.
El éxito en la obtención de información genética a partir de estructuras óseas está condicionado, aparte de por el tipo de estructura, por las condiciones del enterramiento.
Las características del ambiente en el que se encuentra depositado un resto pueden ralentizar o incluso detener el proceso de degradación.
caracteristicas
La humedad
Un pH neutro
La temperatura
Los compuestos del suelo.
Segun el estudio hay muchas partes del cuerpo que se degradan rapidamente, pero realizado los estudios hay diversas partes del cuerpo que son buenas muestras para tomar el ADN, debido a su conservacion con el paso del tiempo y son: - Huesos largos (femur, tibia, perone) - Dientes - Craneos
La obtencion de material genetico endogeno a partir de restos oseos se enfrenta con una serie de dificultades de tipo tecnico. Se podrían resumir fundamentalmente en 4:
a) escasez
b) fragmentación de las cadenas
c) modificaciones moleculares
d) la
presencia de inhibidores de la PCR en los extracto.
Escasez y fragmentacion de las cadenas de ADN son manifestaciones de un mismo fenomeno, la degradacion posmorten de material genetico. Los modificadores moleculares y la presencia de inhibidores de la PCR relacionada con resto de caracteristicas
Proceso de extracción de ADN a partir
de estructuras óseas
Un alto porcentaje de los problemas que afectan al éxito en la obtención de ADN a partir de RO son debidos a la acción de los inhibidores.
Antes de valorar el proceso de extracción, conviene comentar por su importancia la necesidad de aplicación de una serie de medidas de seguridad para evitar y/o controlar posibles problemas de contaminación.
Van desde la propia infraestructura del laboratorio, hasta llegar a la inclusión de controles a lo largo de todas las etapas del proceso y la aplicación de criterios de autentificación.
pasos
Pretratamiento
Extracción
protocolos
Protocolo «Fenol:cloroformo»
Protocolo «Silica-sal»
Protocolo «Desmineralización-silica» (International
Commission on Missing Persons)
Protocolo «Fishing» (purificación)
Valoración final de los métodos de extracción
de ADN considerados
En el caso de la identificación genética de restos humanos esqueletizados, uno de los principales factores limitantes,además de la degradación y modificación del ADN, es lapresencia de inhibidores de la PCR. .
En cualquier caso, si se sospecha que serán mínimas las cantidades de ADN existentes en la muestra, se hace recomendable la aplicación directa del método silica-sal66,70 o el de «desmineralización-silica» de la ICMP61.
En definitiva, el analista deberá valorar el método de extracción de ADN a partir de restos esqueletizados más apropiado a emplear, en función de las características y condiciones de la muestra que llegue al laboratorio.
Por ello, el proceso de extracción de ADN constituye un paso primordial, igual que en el mismo sean eliminados en la medida de lo posible dichos inhibidores
Problemas metodologicos en la obtencion de ADN a partir de restos oseos
Muestras mas adecuadas para la obtencion de ADN a partir de estructuras esqueleticas