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Preparação de Lâminas Histológicas e Coloração de Rotina Kamilla Ribeiro…

- - - - 04- Clarificação
        
        05- Impregnação
        
        06- Inclusão
        
        07- Corte
        
        08- Coloração
        
        09- Montagem
        
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        OBJETIVOS
        
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        CUIDADOS
        
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        OBJETIVOS
        
        Mesmo após a fixação e a desidratação, as amostras de tecido são ainda muito frágeis. Acontece então a impregnação do tecido com uma substância de consistência firme (geralmente parafina) envolvendo o exterior da peça, após esfriar e endurecer, forma um bloco que será submetido posteriormente à microtomia
        
        CUIDADOS
        
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        PRINCIPAIS AGENTES IMPREGNADORES
        
        parafina
        
        resina
        
        ágar
        
        gelatina
        
        parafina plástica
        
        polietileno glicol
        
        celoidina
        
        OBJETIVOS
        
        Nessa etapa, as peças são mergulhadas em alguma substância de consistência firme para que adquiram rigidez suficiente e seja possível a realização de cortes finos.
        
        CUIDADOS
        
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        A substância ultilizada precisa ter afinidade com o diafanizador utilizado anteriormente e que se solidifique de maneira controlada, sendo fluida o suficiente para penetrar nos espaços internos do tecido e depois endurecer para formar o bloco
        
        Para que os tecidos sejam infiltrados pela parafina, é preciso que se atinja seu ponto de fusão (aproximadamente 60°C) em estufa histológica
        
        Temperaturas muito elevadas podem causar danos ao tecido, tornando as peças muito retraídas e com rigidez exagerada, dificultando sua seção.
        
        Por outro lado, se a temperatura estiver abaixo do ponto de fusão da parafina, não se torna possível a impregnação da peça.
        
        É importante que, antes de cada processo, a parafina seja filtrada, evitando o carreamento de impurezas para o material
        
        OBJETIVO
        
        A parafina é insolúvel, também, em álcool. Por isso, essa parte do processo consiste em retirar o álcool presente nas peças após o processo de desidratação, e substituir por um produto com o qual a parafina tenha afinidade
        
        PRINCIPAIS AGENTES DIAFANIZADORES
        
        xilol
        
        toluol
        
        benzeno
        
        óleo de cedro
        
        acetato butílico
        
        dióxido dietileno
        
        benzoato metílico
      - OBJETIVOS
        
        O corte histológico, mesmo após a fixação, ainda retém cerca de 85% de água em seu interior e, como se sabe, a parafina (necessária no processo de inclusão) é um produto derivado do petróleo, portanto, insolúvel em água. Desta forma, para que ela consiga penetrar no tecido processado, é necessário que a água presente seja retirada
        
        PRINCIPAIS DESIDRATANTES
        
        álcool etílico
        
        álcoois butílico, isopropílico e metílico,
        
        acetona
        
        éter
        
        clorofórmio
        
        óxido propileno
    - - PRINCIPAIS AGENTES FIXADORES
        
        FIXADORES COAGULANTES
        
        Rápida a modificação de seus aspectos externos, como coloração e opacidade.
        
        Não se ligam as proteínas do tecido
        
        Há coagulação de moléculas
        
        Cloreto de Mercúrio
        
        Ácido Pícrico
        
        etanol
        
        metanol
        
        FIXADORES NÃO COAGULANTES
        
        Se ligam as proteínas
        
        Não há processo de coagulação
        
        formaldeído
        
        paraformaldeído
        
        teróxido de ósmio
        
        glutaraldeído
        
        OUTROS FIXADORES
        
        Fixadores aldeídos: formaldeído, glutaraldeído e paraformaldeído comercial;
        
        Agentes oxidantes: teróxido de ósmio, dicromato de potássio, permanganato de potássio e ácido crômico;
        
        Agentes desnaturantes ou coagulantes de proteínas: metanol, etanol, aceton e ácido acético;
        
        Mecanismo desconhecido: cloreto de mercúrio, ácido pícrico e sais de zinco; Combinação de reagentes: tetróxido de ósmio e glutaraldeído, tetróxido de ósmio e iodeto de zinco, glutaraldeído e carbodiamida, formaldeído e glutaraldeído
      - OBJETIVOS
        
        Inibir a autólise tecidual;
        
        Coagular ou endurecer o tecido e tornar difusíveis as substâncias insolúveis;
        
        Proteger, através do endurecimento, os tecidos moles no manuseio e procedimentos técnicos posteriores;
        
        Preservar os vários componentes celulares e tissulares;
        
        Melhorar a diferenciação ótica dos tecidos;
        
        -Facilitar a subsequente coloração.
      - CUIDADOS
        
        O material coletado deve ser mergulhado no fixador o mais rápidp possível
        
        O volume de fixador deverá ser no mínimo 10 vezes maior que o volume da amostra tecidual coletada.
        
        de forma geral, caso o fragmento tenha uma espessura de cerca de 4 mm, o tempo mínimo de fixação é de doze horas, porém depende do tamanho da peça, constituição do tecido, poder de fixação do fixador, objetivos a pesquisar e temperatura ambiente
        
        A temperatura geralmente ideal é de 0°C a 6°C
        
        O ácido usado deve ser completamente removido do tecido depois de terminada a descalcificação, por meio de lavagem abundante e cuidadosa em água corrente ou álcool
        
        As amostras devem conter no máximo a espessura de 6mm
        
        O PH deve estar entre 6,0 e 7,0