Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
Evidences for lipid involvement in SARS-CoV-2 cytopathogenesis, Que son…
Evidences for lipid involvement in SARS-CoV-2 cytopathogenesis
Materiales y métodos
Aislados de SARS-CoV-2 y SARS-CoV-1
Se aisló y cultivó de los primeros casos de COVID-19 en el IRCCS
Se utilizó el aislado TOR2 en el caso del SARS-CoV-1
Se tiño suspensiones virales de SARS-CoV-2
con tinción negativa
Tejidos pulmonares de 20 pacientes infectados con SARS-CoV-2
Se infectaron dos tipos de muestra
Tejidos de Pulmón
Analizadas con microscopio de transmisión por electrones
Analizadas con Microscopía de escaneo láser confocal
Líneas celulares VERO
Analizadas con Microscopía de escaneo láser confocal
Análisis estadístico
Se utilizó la prueba t de Student de dos lados, no apareados
P valor < 0.05
Resultados
Morfología del SARS-CoV-2
Las partículas virales revelaron formas esféricas
La distribución de picos en la superficie de los viriones no fue tan regular como en otros coronavirus
Diametro de los virus: 80-102nm
Longitud de los picos: 9-12,5nm
Algunas particulas mostraron parte del material de proteína ribonucleico
Efectos citofáticos en Células Vero E6 infectadas
Con SARS-CoV-2
Luego de 24 horas, las células perdieron su forma alargada
Presencia prominente de filopodios en la membrana plasmática
Se encontraron numerosas gotitas de lípidos que iban aumentando con el tiempo de infección
Con tamaños y morfología variables
Sin membrana circundante
Membrana externa oscura
Identificados como lipolisomas descritos en humanos con anomalias en el metabolismo lipídico
Pueden jugar un paso importante en el ensamblaje del virus
Con mitocondrias en contacto
las mitocondrias aparecían alteradas y mostraban crestas hinchadas
A las 48h, las células mostraban signos de degeneración
Con SARS-CoV-1
No se observó presencia de gotitas de lípidos
Formación de grandes tabiques en las células infectadas
Desaparición de crestas e hinchazón en las mitocondrias
Aparición de vacuolas y redondez de las células
Muerte celular apoptótica y necrótica
Gotitas de lípidos
Detección de dsRNA viral
A las 24 hpi el aumento del número de células infectadas era mayor al 80%
Con el tiempo también aumentaba la presencia de gotitas de lípidos en el citoplasma de las células
Por medio de una tinción doble
Tejido pulmonar de pacientes con COVID-19
Examen microscópico
Neumocitos con núcleo con cromatina fina y uniformemente dispersa
Presencia del virus dentro de los neumocitos tipo II
Además, se encontró presencia inusual de acumulación de gotitas de lípidos
El análisis de cuantificación mostró un número medio de 5,24 ± 2,78 gotas por célula
Se observaron sitios de contacto entre mitocondrias y LD
Los neumocitos mostraron la presencia de numerosas vacuolas y mitocondrias hinchadas
Discusión
Tres coronavirus (CoVs) causan enfermedades respiratorias zoonóticas
Virus de ARN de cadena positiva
Con morfología esférica
Con proyecciones de glicoproteínas en forma de espiga
Síndrome respiratorio agudo severo de coronavirus (SARS-CoV) en 2003,
Síndrome respiratorio de Oriente Medio coronavirus (MERS-CoV), en 2012
Síndrome respiratorio agudo severo de coronavirus (SARS-Cov-2) en 2019
Los CoV presentan una envoltura formada por una bicapa lipídica
La membrana intracelular juega un papel importante en la replicación de los coronavirus
Una diferencia importante en comparación con la infección por SARS-CoV-1, son las gotitas de lípidos inducidas por la infección por SARS-CoV-2
Estas gotitas, tanto in vitro como en neumocitos de tipo II, parecen similares a las que se sabe que ocurren en los hepatocitos como consecuencia de la infección por HCV (hepatitis C)
La muerte celular inducidas por SARS-CoV-2 es diferente a los efectos citofáticos del SARS-CoV-1
Estas muertes celulares tenian características morfológicas de apoptosis y necrosis, es decir, piroptosis
Introducción
SARS-CoV-2
A causado 1,5 millones de muertes
En estudios citopáticos in vitro no es posible captar la patología in vivo
Por lo que se tiene que hacer paralelo a este tipo de estudio
Es un virus zoonótica que apareció a finales de Diciembre de 2019
Es importante saber la localización intracelular y los efectos citopátocicos
Para dilucidar los mecanismos patogénicos del SARS-CoV-2.
Que son los coronavirus